Aller directement au contenu
HK EGFP-H2B
Tissu
Col de l'utérus
Maladie
Carcinome
Synonymes
HeLa Kyoto H2B-EGFP, HeLa Kyoto H2B EGFP, HeLa-H2B-GFP

Documents

HK EGFP-H2B

Cell line · Référence du produit 300673

The HK EGFP-H2B cell line is a genetically modified Hela Kyoto cell line used primarily for the study of chromatin dynamics and nuclear processes. This ce...

€800.00hors taxes et frais de port
Stock limité
Lot
Recommandé (lot le plus récent)
1

01Informations générales

Description

La lignée cellulaire HK EGFP-H2B est une lignée cellulaire Hela Kyoto génétiquement modifiée utilisée principalement pour l'étude de la dynamique de la chromatine et des processus nucléaires. Cette lignée cellulaire exprime une protéine de fusion composée de la protéine fluorescente verte améliorée (EGFP) et de l'histone H2B. L'intégration de l'EGFP dans la protéine H2B permet la visualisation en temps réel de la chromatine dans les cellules vivantes par microscopie à fluorescence, ce qui fournit des informations précieuses sur l'organisation spatiale et temporelle du noyau.

La fusion EGFP-H2B facilite de nombreuses applications en biologie cellulaire, notamment l'étude de la progression du cycle cellulaire, de la mitose et de la régulation de l'expression génétique. En observant les motifs de fluorescence, les chercheurs peuvent identifier et analyser les phases du cycle cellulaire, la ségrégation chromosomique et les changements structurels au sein du noyau. Cette lignée cellulaire est dérivée de cellules humaines adultes, ce qui garantit sa pertinence pour la biologie humaine. Elle est utilisée à la fois dans la recherche biologique fondamentale et dans des études pharmaceutiques plus appliquées.

En outre, la lignée cellulaire HK EGFP-H2B est un outil essentiel pour la recherche en épigénétique. La possibilité d'observer directement les comportements des histones aide à comprendre les mécanismes épigénétiques qui sous-tendent l'expression et l'extinction des gènes, ainsi que les effets de divers modificateurs épigénétiques. L'application robuste de la lignée cellulaire dans les expériences d'imagerie de cellules vivantes la rend indispensable pour les études détaillées nécessitant une analyse cellulaire dynamique.

Tissu
Col de l'utérus
Maladie
Carcinome
Synonymes
  • HeLa Kyoto H2B-EGFP
  • HeLa Kyoto H2B EGFP
  • HeLa-H2B-GFP

02Classification

Organisme
Humain
Sexe
Femme
Propriétés de croissance
Adepte
Statut OGM
GMO-S1
Informations détaillées sur le statut OGM
GMO-S1: This HeLa Kyoto line contains an EGFP-H2B construct allowing real-time visualization of chromatin organization. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Niveau de biosécurité
1

03Caractéristiques

Morphologie
Cellules de type épithélial avec une forme de pierre en mosaïque

04Identifiants

Référence
HK EGFP-H2B (numéro de catalogue 300673 de Cytion)
Numéro d'identification fiscale NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_1D63
Déposant
Le laboratoire Ellenberg (EMBL)

05Expression et sensibilité

Expression des protéines
EGFP-H2B : Localisation/Gène : 1..589 / Pcmv, 613..1329 / EGFP, 1387..1764 / H2B, 3001..3795 / KanR/NeoR
Produits
Promoteur CMV, Histone H2B, Néomycine, Phosphotransférase

06Manipulation et culture

Milieu de culture
DMEM, w : 4.5 g/L Glucose, w : 4 mM L-Glutamine, w : 3.7 g/L NaHCO3, w : 1.0 mM Pyruvate de sodium (numéro d'article Cytion 820300a)
Atmosphère d'incubation

37°C, 5%CO2, atmosphère humidifiée.

Compléments alimentaires
Compléter le milieu avec 10% de FBS
Réactif de dissociation
Accutase
Repiquage
Retirer l'ancien milieu des cellules adhérentes et les laver avec du PBS dépourvu de calcium et de magnésium. Pour les flacons T25, utiliser 3-5 ml de PBS, et pour les flacons T75, 5-10 ml. Ensuite, recouvrir complètement les cellules avec Accutase, en utilisant 1 à 2 ml pour les flacons T25 et 2,5 ml pour les flacons T75. Laisser les cellules incuber à température ambiante pendant 8-10 minutes pour les détacher. Après incubation, mélanger délicatement les cellules avec 10 ml de milieu pour les remettre en suspension, puis centrifuger à 300xg pendant 3 minutes. Jeter le surnageant, remettre les cellules en suspension dans du milieu frais et les transférer dans de nouveaux flacons contenant déjà du milieu frais.
Densité de semis
1 x 104 cellules/cm2
Renouvellement des fluides
2 à 3 fois par semaine
Récupération après le dégel
Après décongélation, ensemencer les cellules à raison de 5 x 104 cellules/cm2 et laisser les cellules se remettre du processus de congélation et adhérer pendant au moins 24 heures.
Décongélation et mise en culture
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Contrôle qualité et cryoconservation

Stérilité

La contamination par les mycoplasmes est exclue à l'aide de tests basés sur la PCR et de méthodes de détection des mycoplasmes basées sur la luminescence.

Pour s'assurer de l'absence de contamination bactérienne, fongique ou levurienne, les cultures cellulaires font l'objet d'inspections visuelles quotidiennes.

Milieu de congélation
Comme milieu de cryoconservation, nous utilisons un milieu de croissance complet (comprenant du FBS) + 10 % de DMSO pour une viabilité adéquate après décongélation, ou CM-1 (numéro de catalogue 800100 de Cytion), qui comprend des osmoprotectants et des stabilisateurs métaboliques optimisés pour améliorer la récupération et réduire le stress induit par la cryogénisation.
Conditions de stockage

Pour une conservation à long terme, placer les flacons dans de l'azote liquide en phase vapeur à une température comprise entre -150 et -196 °C environ. Le stockage à -80 °C n'est acceptable qu'en tant qu'étape intermédiaire de courte durée avant le transfert dans l'azote liquide.

Conditions de livraison

Les lignées cellulaires cryoconservées sont expédiées sur glace sèche dans des emballages isolés et validés, avec suffisamment de réfrigérant pour maintenir une température d'environ -78 °C tout au long du transport. À la réception, inspecter immédiatement le conteneur et transférer sans délai les flacons dans un lieu de stockage approprié.

08Donateur

Âge du donneur
30 ans
Origine ethnique
Afro-américain