Přejít na obsah
HK EGFP-H2B
Tkáň
Cervix
Nemoc
Karcinom
Synonyma
HeLa Kyoto H2B-EGFP, HeLa Kyoto H2B EGFP, HeLa-H2B-GFP

Dokumenty

HK EGFP-H2B

Cell line · Číslo výrobku 300673

The HK EGFP-H2B cell line is a genetically modified Hela Kyoto cell line used primarily for the study of chromatin dynamics and nuclear processes. This ce...

€800.00bez DPH a poštovného
Nízký stav zásob
Lot
Doporučeno (nejčerstvější šarže)
1

01Obecné informace

Popis

Buněčná linie HK EGFP-H2B je geneticky modifikovaná buněčná linie Hela Kyoto, která se používá především ke studiu dynamiky chromatinu a jaderných procesů. Tato buněčná linie exprimuje fúzní protein skládající se ze zeleného fluorescenčního proteinu (EGFP) a histonu H2B. Integrace EGFP do proteinu H2B umožňuje vizualizaci chromatinu v živých buňkách v reálném čase pod fluorescenčním mikroskopem, což poskytuje cenné poznatky o prostorové a časové organizaci jádra.

Fúze EGFP-H2B usnadňuje řadu aplikací v buněčné biologii, včetně studia průběhu buněčného cyklu, mitózy a regulace genové exprese. Pozorováním fluorescenčních vzorců mohou vědci identifikovat a analyzovat fáze buněčného cyklu, chromozomální segregaci a strukturální změny v jádře. Tato buněčná linie je odvozena z dospělých lidských buněk, což zajišťuje její relevanci pro lidskou biologii, a využívá se jak v základním biologickém výzkumu, tak v aplikovanějších farmaceutických studiích.

Buněčná linie HK EGFP-H2B navíc slouží jako klíčový nástroj ve výzkumu epigenetiky. Možnost přímo pozorovat chování histonů pomáhá pochopit epigenetické mechanismy, které jsou základem genové exprese a umlčování, a také účinky různých epigenetických modifikátorů. Robustní použití buněčné linie v experimentech se zobrazováním živých buněk ji činí nepostradatelnou pro podrobné studie vyžadující dynamickou buněčnou analýzu.

Tkáň
Cervix
Nemoc
Karcinom
Synonyma
  • HeLa Kyoto H2B-EGFP
  • HeLa Kyoto H2B EGFP
  • HeLa-H2B-GFP

02Klasifikace

Organismus
Člověk
Sex
Žena
Růstové vlastnosti
Přívrženec
Stav GMO
GMO-S1
Podrobnosti o statusu GMO
GMO-S1: This HeLa Kyoto line contains an EGFP-H2B construct allowing real-time visualization of chromatin organization. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Úroveň biologické bezpečnosti
1

03Charakteristika

Morfologie
Buňky podobné epitelu s mozaikovitým tvarem kamínků

04Identifikátory

Citace
HK EGFP-H2B (katalogové číslo Cytion 300673)
Daňové identifikační číslo NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_1D63
Vkladatel
Ellenbergova laboratoř (EMBL)

05Exprese a náchylnost

Exprese proteinů
EGFP-H2B: Umístění/geny: 1..589 / Pcmv, 613..1329 / EGFP, 1387..1764 / H2B, 3001..3795 / KanR/NeoR
Produkty
Promotor CMV, histon H2B, neomycin, fosfotransferáza

06Manipulace a chov

Pěstovací médium
DMEM, w: 4,5 g/l glukózy, w: 4 mM L-glutaminu, w: 3,7 g/l NaHCO3, w: 1,0 mM pyruvátu sodného (číslo výrobku Cytion 820300a)
Inkubační atmosféra

37 °C, 5 %CO2, zvlhčená atmosféra.

Doplňky stravy
Doplňte médium o 10% FBS
Disociační činidlo
Accutase
Subkultivace
Odstraňte staré médium z adherovaných buněk a promyjte je PBS bez vápníku a hořčíku. Pro baňky T25 použijte 3-5 ml PBS a pro baňky T75 5-10 ml. Poté buňky zcela zakryjte přípravkem Accutase, přičemž použijte 1-2 ml pro baňky T25 a 2,5 ml pro baňky T75. Nechte buňky inkubovat při pokojové teplotě po dobu 8-10 minut, aby se oddělily. Po inkubaci jemně promíchejte buňky s 10 ml média, aby byly znovu suspendovány, a poté je odstřeďte při 300xg po dobu 3 minut. Supernatant vyhoďte, buňky znovu rozpusťte v čerstvém médiu a přeneste je do nových baněk, které již obsahují čerstvé médium.
Hustota výsevu
1 x 104 buněk/cm2
Obnova tekutin
2 až 3krát týdně
Zotavení po rozmrazení
Po rozmrazení naneste buňky v množství 5 x 104 buněk/cm2 a nechte je alespoň 24 hodin zotavit se z procesu zmrazení a přilnout.
Rozmrazování a kultivace
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kontrola kvality a kryokonzervace

Sterilita

Kontaminace mykoplazmaty je vyloučena jak pomocí testů založených na PCR, tak pomocí luminiscenčních metod detekce mykoplazmy.

Aby se zajistilo, že nedojde ke kontaminaci bakteriemi, plísněmi nebo kvasinkami, jsou buněčné kultury denně podrobovány vizuálním kontrolám.

Mrazicí médium
Jako kryokonzervační médium používáme kompletní růstové médium (včetně FBS) + 10 % DMSO pro zajištění dostatečné životaschopnosti po rozmrazení nebo CM-1 (katalogové číslo 800100 společnosti Cytion), které obsahuje optimalizované osmoprotektanty a metabolické stabilizátory pro zlepšení regenerace a snížení stresu způsobeného kryo.
Podmínky skladování

Pro dlouhodobé uchování umístěte lahvičky do kapalného dusíku v plynné fázi při teplotě přibližně -150 až -196 °C. Skladování při -80 °C je přijatelné pouze jako krátký přechodný krok před přemístěním do kapalného dusíku.

Dopravní podmínky

Kryokonzervované buněčné linie se přepravují na suchém ledu v ověřených, izolovaných obalech s dostatečným množstvím chladiva, aby se po celou dobu přepravy udržovala teplota přibližně -78 °C. Po obdržení ihned zkontrolujte obal a neprodleně přeneste lahvičky do vhodného skladu.

08Dárce

Věk dárce
30 let
Etnická příslušnost
Afroameričan