Премини към съдържанието
HK EGFP-H2B
Тъкан
Цервикс
Заболяване
Карцином
Синоними
HeLa Kyoto H2B-EGFP, HeLa Kyoto H2B EGFP, HeLa-H2B-GFP

Документи

HK EGFP-H2B

Cell line · Номер на продукта 300673

The HK EGFP-H2B cell line is a genetically modified Hela Kyoto cell line used primarily for the study of chromatin dynamics and nuclear processes. This ce...

€800.00без ДДС и доставка
Наличността е ниска
Лот
Препоръчани (най-новата партида)
1

01Обща информация

Описание

Клетъчната линия HK EGFP-H2B е генетично модифицирана клетъчна линия Hela Kyoto, използвана основно за изследване на динамиката на хроматина и ядрените процеси. Тази клетъчна линия експресира фюжън протеин, състоящ се от подобрен зелен флуоресцентен протеин (EGFP) и хистон H2B. Интегрирането на EGFP в H2B протеина позволява визуализиране на хроматина в реално време в живи клетки под флуоресцентна микроскопия, което осигурява ценни данни за пространствената и времевата организация на ядрото.

Сливането на EGFP-H2B улеснява многобройни приложения в клетъчната биология, включително изучаването на прогресията на клетъчния цикъл, митозата и регулирането на генната експресия. Наблюдавайки моделите на флуоресценция, изследователите могат да идентифицират и анализират фазите на клетъчния цикъл, хромозомната сегрегация и структурните промени в ядрото. Тази клетъчна линия е получена от възрастни човешки клетки, което гарантира нейното значение за човешката биология, и се използва както за фундаментални биологични изследвания, така и за по-приложни фармацевтични проучвания.

Освен това клетъчната линия HK EGFP-H2B служи като важен инструмент в изследванията на епигенетиката. Възможността за пряко наблюдение на поведението на хистоните помага за разбирането на епигенетичните механизми, които са в основата на генната експресия и заглушаването, както и на ефектите на различни епигенетични модификатори. Надеждното приложение на клетъчната линия при експерименти с живо изображение на клетки я прави незаменима за подробни изследвания, изискващи динамичен клетъчен анализ.

Тъкан
Цервикс
Заболяване
Карцином
Синоними
  • HeLa Kyoto H2B-EGFP
  • HeLa Kyoto H2B EGFP
  • HeLa-H2B-GFP

02Класификация

Организъм
Човек
Секс
Женски
Свойства, свързани с растежа
Привърженик
Статус на ГМО
GMO-S1
Подробности относно статуса на ГМО
GMO-S1: This HeLa Kyoto line contains an EGFP-H2B construct allowing real-time visualization of chromatin organization. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Ниво на биологична безопасност
1

03Характеристики

Морфология
Епителиални клетки с форма на мозаечно камъче

04Идентификатори

Източник
HK EGFP-H2B (каталожен номер 300673 на Cytion)
Данъчен идентификационен номер в NCBI
9606
Целозавър
CVCL_1D63
Вложител
Лабораторията на Елънбърг (EMBL)

05Проява и предразположеност

Експресия на протеини
EGFP-H2B: Местоположение/ген: 1..589 / Pcmv, 613..1329 / EGFP, 1387..1764 / H2B, 3001..3795 / KanR/NeoR
Продукти
CMV Promotor, хистон H2B, неомицин, фосфотрансфераза

06Обработка и отглеждане

Хранителна среда
DMEM, w: 4,5 g/L глюкоза, w: 4 mM L-глутамин, w: 3,7 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM натриев пируват (номер на изделието на Cytion 820300a)
Атмосфера за инкубация

37°C, 5%CO2, овлажнена атмосфера.

Добавки
Допълнете средата с 10% FBS
Реагент за дисоциация
Accutase
Пресаждане
Отстранете старата среда от адхезивните клетки и ги промийте с PBS, която не съдържа калций и магнезий. За колби Т25 използвайте 3-5 ml PBS, а за колби Т75 - 5-10 ml. След това покрийте клетките изцяло с Accutase, като използвате 1-2 ml за колби Т25 и 2,5 ml за колби Т75. Оставете клетките да се инкубират на стайна температура за 8-10 минути, за да се отделят. След инкубацията внимателно разбъркайте клетките с 10 ml среда, за да ги ресуспендирате, след което центрофугирайте при 300xg за 3 минути. Изхвърлете супернатантата, ресуспендирайте клетките в прясна среда и ги прехвърлете в нови колби, които вече съдържат прясна среда.
Плътност на засяването
1 x 104 клетки/cm2
Обновяване на течността
2 до 3 пъти седмично
Възстановяване след размразяване
След размразяване, поставете клетките в плаки с плътност 5 x 104 клетки/cm2 и оставете клетките да се възстановят от процеса на замразяване и да се прикрепят за най-малко 24 часа.
Размразяване и култивиране
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Контрол на качеството и криоконсервация

Стерилност

Замърсяването с микоплазма се изключва както чрез PCR-базирани анализи, така и чрез луминесцентни методи за откриване на микоплазма.

За да се гарантира, че няма бактериално, гъбично или дрождево замърсяване, клетъчните култури се подлагат на ежедневни визуални проверки.

Среда за замразяване
Като среда за криоконсервация използваме пълна среда за растеж (включително FBS) + 10% DMSO за адекватна жизнеспособност след размразяване или CM-1 (каталожен номер 800100 на Cytion), която включва оптимизирани осмопротектори и метаболитни стабилизатори за подобряване на възстановяването и намаляване на криоиндуцирания стрес.
Условия за съхранение

За дълготрайно съхранение поставете флаконите в течен азот в парна фаза при температура около -150 до -196 °C. Съхранението при -80 °C е приемливо само като кратък междинен етап преди прехвърлянето в течен азот.

Условия за доставка

Криоконсервираните клетъчни линии се транспортират върху сух лед в утвърдени, изолирани опаковки с достатъчно хладилен агент, за да се поддържа приблизително -78 °C по време на транспортирането. При получаването незабавно прегледайте опаковката и незабавно прехвърлете флаконите за подходящо съхранение.

08Дарител

Възраст на донора
30 години
Етническа принадлежност
Афроамериканец