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- Tessuto
- Cervice
- Malattia
- Carcinoma
- Sinonimi
- HeLa Kyoto H2B-EGFP, HeLa Kyoto H2B EGFP, HeLa-H2B-GFP
Documenti
HK EGFP-H2B
Cell line · Codice prodotto 300673
The HK EGFP-H2B cell line is a genetically modified Hela Kyoto cell line used primarily for the study of chromatin dynamics and nuclear processes. This ce...
Personalizzazione / Suggerimenti
- HK EGFP-H2BCell line€800.00
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01Informazioni generali
- Descrizione
La linea cellulare HK EGFP-H2B è una linea cellulare Hela Kyoto geneticamente modificata utilizzata principalmente per lo studio della dinamica della cromatina e dei processi nucleari. Questa linea cellulare esprime una proteina di fusione costituita da Enhanced Green Fluorescent Protein (EGFP) e dall'istone H2B. L'integrazione di EGFP nella proteina H2B consente di visualizzare in tempo reale la cromatina nelle cellule vive con la microscopia a fluorescenza, fornendo preziose informazioni sull'organizzazione spaziale e temporale del nucleo.
La fusione EGFP-H2B facilita numerose applicazioni in biologia cellulare, tra cui lo studio della progressione del ciclo cellulare, della mitosi e della regolazione dell'espressione genica. Osservando i modelli di fluorescenza, i ricercatori possono identificare e analizzare le fasi del ciclo cellulare, la segregazione cromosomica e i cambiamenti strutturali all'interno del nucleo. Questa linea cellulare è derivata da cellule umane adulte, il che garantisce la rilevanza per la biologia umana, ed è utilizzata sia nella ricerca biologica di base che in studi farmaceutici più applicati.
Inoltre, la linea cellulare HK EGFP-H2B è uno strumento fondamentale per la ricerca epigenetica. La capacità di osservare direttamente i comportamenti degli istoni aiuta a comprendere i meccanismi epigenetici alla base dell'espressione e del silenziamento dei geni, nonché gli effetti di vari modificatori epigenetici. La robusta applicazione della linea cellulare in esperimenti di imaging a cellule vive la rende indispensabile per studi dettagliati che richiedono un'analisi cellulare dinamica.
- Tessuto
- Cervice
- Malattia
- Carcinoma
- Sinonimi
- HeLa Kyoto H2B-EGFP
- HeLa Kyoto H2B EGFP
- HeLa-H2B-GFP
02Classificazione
- Organismo
- Umano
- Sesso
- Donna
- Proprietà di crescita
- Aderente
- Presenza di OGM
- GMO-S1
- Dettagli sullo stato degli OGM
- GMO-S1: This HeLa Kyoto line contains an EGFP-H2B construct allowing real-time visualization of chromatin organization. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
- Livello di biosicurezza
- 1
03Caratteristiche
- Morfologia
- Cellule simili a quelle epiteliali con forma di pietra a mosaico
04Identificatori
- Riferimento bibliografico
- HK EGFP-H2B (numero di catalogo Cytion 300673)
- Codice fiscale NCBI
- 9606
- Cellosaurus
- CVCL_1D63
- Depositario
- Il laboratorio Ellenberg (EMBL)
05Espressione e suscettibilità
- Espressione proteica
- EGFP-H2B: Posizione/Gene: 1..589 / Pcmv, 613..1329 / EGFP, 1387..1764 / H2B, 3001..3795 / KanR/NeoR
- Prodotti
- Promotore CMV, Istone H2B, Neomicina, Fosfotrasferasi
06Manipolazione e coltura
- Terreno di coltura
- DMEM, w: 4,5 g/L di glucosio, w: 4 mM di L-Glutammina, w: 3,7 g/L di NaHCO3, w: 1,0 mM di piruvato di sodio (articolo Cytion numero 820300a)
- Atmosfera di incubazione
37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.
- Integratori
- Integrare il terreno di coltura con il 10% di FBS
- Reagente di dissociazione
- Accutase
- Subcoltura
- Rimuovere il vecchio terreno dalle cellule aderenti e lavarle con PBS privo di calcio e magnesio. Per le fiasche T25, utilizzare 3-5 ml di PBS e per le fiasche T75, 5-10 ml. Quindi, coprire completamente le cellule con Accutase, utilizzando 1-2 ml per le fiasche T25 e 2,5 ml per le fiasche T75. Lasciare incubare le cellule a temperatura ambiente per 8-10 minuti per staccarle. Dopo l'incubazione, mescolare delicatamente le cellule con 10 ml di terreno per risospenderle, quindi centrifugare a 300xg per 3 minuti. Scartare il surnatante, risospendere le cellule in terreno fresco e trasferirle in nuove fiasche contenenti terreno fresco.
- Densità di semina
- 1 x 104 cellule/cm2
- Rinnovo dei fluidi
- da 2 a 3 volte alla settimana
- Recupero post-scongelamento
- Dopo lo scongelamento, piastrare le cellule a 5 x 104 cellule/cm2 e lasciare che le cellule si riprendano dal processo di congelamento e aderiscano per almeno 24 ore.
- Scongelamento e coltura
Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.
Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.
For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.
Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.
Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.
Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.
Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.
Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.
07Controllo di qualità e crioconservazione
- Sterilità
La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.
Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.
- Terreno di coltura congelato
- Come terreno di crioconservazione, utilizziamo un terreno di crescita completo (incluso FBS) + 10% DMSO per un'adeguata vitalità post-scongelamento, o CM-1 (numero di catalogo Cytion 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crio-indotto.
- Condizioni di conservazione
Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.
- Condizioni di spedizione
Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.
08Donatore
- Età dei donatori
- 30 anni
- Etnia
- Afroamericano
09Aspetti legali e di sicurezza
- Misure di sicurezza
- Quando si prevede di conservare una crioviale in azoto liquido per un futuro scongelamento, è obbligatorio attenersi a rigorose misure di sicurezza. Guanti e indumenti protettivi appropriati sono essenziali e l'uso di una maschera facciale o di occhiali di sicurezza è richiesto durante il trasferimento dei campioni congelati da o verso il serbatoio di azoto liquido. Questo per ridurre il rischio di lesioni dovute a potenziali esplosioni di crioviali al momento della rimozione, che possono provocare la proiezione di frammenti taglienti.
- Garanzia
Noi di Cytion garantiamo la qualità e la vitalità dei nostri prodotti. Garantiamo che le nostre cellule saranno vitali all'inizio della coltura per 60 giorni dopo la spedizione dai nostri stabilimenti. Assicuriamo che tutti i materiali sono conformi alle specifiche descritte nel Certificato di Analisi e/o nella Scheda Prodotto
Per tutti i dettagli, consultare la nostra <a href=""/Chi-siamo/Garanzia/"" hreflang=""x-default"">Dichiarazione di Garanzia
- Si applicano gli accordi con terze parti
- Sì
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