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HK EGFP-H2B
Tessuto
Cervice
Malattia
Carcinoma
Sinonimi
HeLa Kyoto H2B-EGFP, HeLa Kyoto H2B EGFP, HeLa-H2B-GFP

Documenti

HK EGFP-H2B

Cell line · Codice prodotto 300673

The HK EGFP-H2B cell line is a genetically modified Hela Kyoto cell line used primarily for the study of chromatin dynamics and nuclear processes. This ce...

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01Informazioni generali

Descrizione

La linea cellulare HK EGFP-H2B è una linea cellulare Hela Kyoto geneticamente modificata utilizzata principalmente per lo studio della dinamica della cromatina e dei processi nucleari. Questa linea cellulare esprime una proteina di fusione costituita da Enhanced Green Fluorescent Protein (EGFP) e dall'istone H2B. L'integrazione di EGFP nella proteina H2B consente di visualizzare in tempo reale la cromatina nelle cellule vive con la microscopia a fluorescenza, fornendo preziose informazioni sull'organizzazione spaziale e temporale del nucleo.

La fusione EGFP-H2B facilita numerose applicazioni in biologia cellulare, tra cui lo studio della progressione del ciclo cellulare, della mitosi e della regolazione dell'espressione genica. Osservando i modelli di fluorescenza, i ricercatori possono identificare e analizzare le fasi del ciclo cellulare, la segregazione cromosomica e i cambiamenti strutturali all'interno del nucleo. Questa linea cellulare è derivata da cellule umane adulte, il che garantisce la rilevanza per la biologia umana, ed è utilizzata sia nella ricerca biologica di base che in studi farmaceutici più applicati.

Inoltre, la linea cellulare HK EGFP-H2B è uno strumento fondamentale per la ricerca epigenetica. La capacità di osservare direttamente i comportamenti degli istoni aiuta a comprendere i meccanismi epigenetici alla base dell'espressione e del silenziamento dei geni, nonché gli effetti di vari modificatori epigenetici. La robusta applicazione della linea cellulare in esperimenti di imaging a cellule vive la rende indispensabile per studi dettagliati che richiedono un'analisi cellulare dinamica.

Tessuto
Cervice
Malattia
Carcinoma
Sinonimi
  • HeLa Kyoto H2B-EGFP
  • HeLa Kyoto H2B EGFP
  • HeLa-H2B-GFP

02Classificazione

Organismo
Umano
Sesso
Donna
Proprietà di crescita
Aderente
Presenza di OGM
GMO-S1
Dettagli sullo stato degli OGM
GMO-S1: This HeLa Kyoto line contains an EGFP-H2B construct allowing real-time visualization of chromatin organization. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Livello di biosicurezza
1

03Caratteristiche

Morfologia
Cellule simili a quelle epiteliali con forma di pietra a mosaico

04Identificatori

Riferimento bibliografico
HK EGFP-H2B (numero di catalogo Cytion 300673)
Codice fiscale NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_1D63
Depositario
Il laboratorio Ellenberg (EMBL)

05Espressione e suscettibilità

Espressione proteica
EGFP-H2B: Posizione/Gene: 1..589 / Pcmv, 613..1329 / EGFP, 1387..1764 / H2B, 3001..3795 / KanR/NeoR
Prodotti
Promotore CMV, Istone H2B, Neomicina, Fosfotrasferasi

06Manipolazione e coltura

Terreno di coltura
DMEM, w: 4,5 g/L di glucosio, w: 4 mM di L-Glutammina, w: 3,7 g/L di NaHCO3, w: 1,0 mM di piruvato di sodio (articolo Cytion numero 820300a)
Atmosfera di incubazione

37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.

Integratori
Integrare il terreno di coltura con il 10% di FBS
Reagente di dissociazione
Accutase
Subcoltura
Rimuovere il vecchio terreno dalle cellule aderenti e lavarle con PBS privo di calcio e magnesio. Per le fiasche T25, utilizzare 3-5 ml di PBS e per le fiasche T75, 5-10 ml. Quindi, coprire completamente le cellule con Accutase, utilizzando 1-2 ml per le fiasche T25 e 2,5 ml per le fiasche T75. Lasciare incubare le cellule a temperatura ambiente per 8-10 minuti per staccarle. Dopo l'incubazione, mescolare delicatamente le cellule con 10 ml di terreno per risospenderle, quindi centrifugare a 300xg per 3 minuti. Scartare il surnatante, risospendere le cellule in terreno fresco e trasferirle in nuove fiasche contenenti terreno fresco.
Densità di semina
1 x 104 cellule/cm2
Rinnovo dei fluidi
da 2 a 3 volte alla settimana
Recupero post-scongelamento
Dopo lo scongelamento, piastrare le cellule a 5 x 104 cellule/cm2 e lasciare che le cellule si riprendano dal processo di congelamento e aderiscano per almeno 24 ore.
Scongelamento e coltura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Controllo di qualità e crioconservazione

Sterilità

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo un terreno di crescita completo (incluso FBS) + 10% DMSO per un'adeguata vitalità post-scongelamento, o CM-1 (numero di catalogo Cytion 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crio-indotto.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

08Donatore

Età dei donatori
30 anni
Etnia
Afroamericano