Skip to content
HK EGFP-H2B
Tissue
צוואר הרחם
Disease
קרצינומה
Synonyms
HeLa Kyoto H2B-EGFP, HeLa Kyoto H2B EGFP, HeLa-H2B-GFP

Documents

HK EGFP-H2B

Cell line · Product number 300673

The HK EGFP-H2B cell line is a genetically modified Hela Kyoto cell line used primarily for the study of chromatin dynamics and nuclear processes. This ce...

US$800.00excl. tax and shipping
Low stock
Lot
Recommended (freshest lot)
1

01General information

Description

קו התאים HK EGFP-H2B הוא קו תאים Hela Kyoto שעבר שינוי גנטי ומשמש בעיקר לחקר הדינמיקה של הכרומטין ותהליכים גרעיניים. קו תאים זה מבטא חלבון פיוז'ן המורכב מחלבון פלואורסצנטי ירוק משופר (EGFP) והיסטון H2B. שילוב ה-EGFP בחלבון H2B מאפשר הדמיה בזמן אמת של הכרומטין בתאים חיים תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי, ומספק תובנות חשובות על הארגון המרחבי והזמני של הגרעין.

הפרוטאין הממוזג EGFP-H2B מאפשר יישומים רבים בביולוגיה של התא, כולל מחקר של התקדמות מחזור התא, מיטוזה וויסות ביטוי גנים. באמצעות תצפית בדפוסי הפלואורסצנציה, חוקרים יכולים לזהות ולנתח שלבים במחזור התא, הפרדת כרומוזומים ושינויים מבניים בתוך הגרעין. קו תאים זה נגזר מתאים אנושיים בוגרים, מה שמבטיח את הרלוונטיות שלו לביולוגיה האנושית, והוא משמש הן במחקר ביולוגי בסיסי והן במחקרים פרמצבטיים יישומיים יותר.

בנוסף, קו התאים HK EGFP-H2B משמש ככלי חיוני במחקר אפיגנטי. היכולת להתבונן ישירות בהתנהגות ההיסטונים מסייעת בהבנת המנגנונים האפיגנטיים העומדים בבסיס ביטוי גנים והשתקתם, כמו גם בהשפעות של מווסתים אפיגנטיים שונים. היישום החזק של קו התאים בניסויי הדמיה של תאים חיים הופך אותו לבלתי נפרד ממחקרים מפורטים הדורשים ניתוח תאי דינמי.

Tissue
צוואר הרחם
Disease
קרצינומה
Synonyms
  • HeLa Kyoto H2B-EGFP
  • HeLa Kyoto H2B EGFP
  • HeLa-H2B-GFP

02Classification

Organism
Human
Sex
Female
Growth properties
Adherent
GMO status
GMO-S1
GMO status details
GMO-S1: This HeLa Kyoto line contains an EGFP-H2B construct allowing real-time visualization of chromatin organization. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Biosafety level
1

03Characteristics

Morphology
תאים דמויי אפיתל בצורת אבן פסיפס

04Identifiers

Citation
HK EGFP-H2B (מספר קטלוגי Cytion 300673)
NCBI TaxID
9606
Cellosaurus
CVCL_1D63
Depositor
מעבדת אלנברג (EMBL)

05Expression and susceptibility

Protein expression
EGFP-H2B: מיקום/גן: 1..589 / Pcmv, 613..1329 / EGFP, 1387..1764 / H2B, 3001..3795 / KanR/NeoR
Products
CMV Promotor, היסטון H2B, ניאומיצין, פוספטטרנספראז

06Handling and culture

Culture medium
DMEM, w: 4.5 g/L גלוקוז, w: 4 mM L-גלוטמין, w: 3.7 g/L NaHCO3, w: 1.0 mM נתרן פירובט (מספר קטלוגי Cytion 820300a)
Incubation atmosphere

37°C, 5%CO2, אווירה לחה.

Supplements
הוסף לתווך 10% FBS
Dissociation reagent
אקוטאז
Subculturing
הסר את המדיום הישן מהתאים הדבוקים ושטוף אותם ב-PBS ללא סידן ומגנזיום. עבור בקבוקי T25, השתמש ב-3-5 מ"ל PBS, ועבור בקבוקי T75, השתמש ב-5-10 מ"ל. לאחר מכן, כסה את התאים לחלוטין ב-Accutase, תוך שימוש ב-1-2 מ"ל עבור בקבוקי T25 ו-2.5 מ"ל עבור בקבוקי T75. השאר את התאים לדגירה בטמפרטורת החדר למשך 8-10 דקות כדי לנתק אותם. לאחר הדגירה, ערבב בעדינות את התאים עם 10 מ"ל של מדיום כדי להחזיר אותם לתמיסה, ואז סובב בצנטריפוגה ב-300xg למשך 3 דקות. השלך את הנוזל העליון, החזר את התאים לתמיסה במדיום טרי והעבר אותם לצלחות חדשות שכבר מכילות מדיום טרי.
Seeding density
1 x 104 תאים/סמ"ר
Fluid renewal
2 עד 3 פעמים בשבוע
Post-thaw recovery
לאחר ההפשרה, צלחת את התאים ב-5 x 104 תאים/סמ"ר והניח לתאים להתאושש מתהליך ההקפאה ולהידבק למשך 24 שעות לפחות.
Thawing and culturing
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Quality control and cryopreservation

Sterility

זיהום במיקופלסמה נשלל באמצעות בדיקות מבוססות PCR ושיטות זיהוי מיקופלסמה מבוססות לומניסצנציה.

כדי להבטיח שאין זיהום חיידקי, פטרייתי או שמרי, תרבויות התאים עוברות בדיקות ויזואליות יומיות.

Freeze medium
כמדיום לשימור בקירור, אנו משתמשים במדיום גידול מלא (כולל FBS) + 10% DMSO כדי להבטיח חיוניות נאותה לאחר ההפשרה, או CM-1 (מספר קטלוגי Cytion 800100), הכולל חומרים אוסמו-מגנים ומייצבי מטבוליזם משופרים כדי לשפר את ההתאוששות ולהפחית את הלחץ הנגרם מהקפאה.
Storage conditions

לשימור לטווח ארוך, יש להניח את הבקבוקונים בחנקן נוזלי במצב של אדי בטמפרטורה של כ-150 עד 196 מעלות צלזיוס. אחסון בטמפרטורה של 80 מעלות צלזיוס מקובל רק כצעד ביניים קצר לפני העברה לחנקן נוזלי.

Shipping conditions

שורות תאים שהוקפאו נשלחות בקרח יבש באריזה מאושרת ומבודדת עם כמות מספקת של חומר קירור כדי לשמור על טמפרטורה של כ-78°C- במהלך ההובלה. עם קבלת המשלוח, יש לבדוק את המכל מיד ולהעביר את הבקבוקונים ללא דיחוי לאחסון מתאים.

08Donor

Donor age
30 שנה
Ethnicity
אפרו-אמריקאי