Skip to content
HK EB3-EGFP
Tissue
צוואר הרחם
Disease
קרצינומה
Synonyms
HeLa Kyoto EB3-EGFP, HeLa Kyoto EB3 EGFP, HeLa Kyoto EGFP-EB3

Documents

HK EB3-EGFP

Cell line · Product number 300668

Hela Kyoto EB3-EGFP is a derivative of the HeLa Kyoto cell line, specifically engineered to express the End-Binding Protein 3 (EB3) tagged with Enhanced G...

US$800.00excl. tax and shipping
Low stock
Lot
Recommended (freshest lot)
1

01General information

Description

Hela Kyoto EB3-EGFP הוא נגזרת של קו התאים HeLa Kyoto, שתוכנן במיוחד כדי לבטא את החלבון End-Binding Protein 3 (EB3) המסומן בחלבון פלואורסצנטי ירוק משופר (EGFP). קו תאים זה משמש בדרך כלל במחקרים המתמקדים בהבנת הדינמיקה של המיקרוטובולים, בשל הסימון הפלואורסצנטי של EB3, חלבון הקשור לקצוות החיוביים של המיקרוטובולים. הביטוי של EGFP מספק סמן פלואורסצנטי המאפשר הדמיה בזמן אמת של התנהגות המיקרוטובולים בתאים חיים תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי.

קו תאים זה הוא בעל ערך רב במיוחד בביולוגיה של התא ובמחקר הסרטן, שבהם הבנת המכניקה של חלוקת התאים וההובלה התאית היא קריטית. הביטוי היציב של EB3-EGFP אינו מפריע לתפקוד התקין של המיקרוטובולים, מה שהופך תאים אלה לכלי אמין למחקרים מפורטים של תהליכים תאיים התלויים בדינמיקה של המיקרוטובולים.

Tissue
צוואר הרחם
Disease
קרצינומה
Synonyms
  • HeLa Kyoto EB3-EGFP
  • HeLa Kyoto EB3 EGFP
  • HeLa Kyoto EGFP-EB3

02Classification

Organism
Human
Sex
Female
Growth properties
Adherent
GMO status
GMO-S1
GMO status details
GMO-S1: This HeLa Kyoto EB3-EGFP line contains an EGFP-tagged EB3 construct for dynamic microtubule visualization. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Biosafety level
1

03Characteristics

Morphology
תאים דמויי אפיתל בצורת אבן פסיפס

04Identifiers

Citation
HK EB3-EGFP (מספר קטלוגי Cytion 300668)
NCBI TaxID
9606
Cellosaurus
CVCL_1D61
Depositor
מעבדת אלנברג (EMBL)

05Expression and susceptibility

Protein expression
MEGFP (חלבון קישור קצה מיקרוטובולי 3 mEGFP מתויג): מיקום/גן: 1..589 / Pcmv, 652..1497 / EB3, 1516..2235 / EGFP, 3466..4260 / KanR/NeoR
Products
CMV Promotor EB3, Neomycin, Phosphotransferase

06Handling and culture

Culture medium
DMEM, w: 4.5 g/L גלוקוז, w: 4 mM L-גלוטמין, w: 3.7 g/L NaHCO3, w: 1.0 mM נתרן פירובט (מספר קטלוגי Cytion 820300a)
Incubation atmosphere

37°C, 5%CO2, אווירה לחה.

Supplements
הוסף לתווך 10% FBS
Dissociation reagent
אקוטאז
Subculturing
הסר את המדיום הישן מהתאים הדבוקים ושטוף אותם ב-PBS ללא סידן ומגנזיום. עבור בקבוקי T25, השתמש ב-3-5 מ"ל PBS, ועבור בקבוקי T75, השתמש ב-5-10 מ"ל. לאחר מכן, כסה את התאים לחלוטין ב-Accutase, תוך שימוש ב-1-2 מ"ל עבור בקבוקי T25 ו-2.5 מ"ל עבור בקבוקי T75. השאר את התאים לדגירה בטמפרטורת החדר למשך 8-10 דקות כדי לנתק אותם. לאחר הדגירה, ערבב בעדינות את התאים עם 10 מ"ל של מדיום כדי להחזיר אותם לתמיסה, ואז סובב בצנטריפוגה ב-300xg למשך 3 דקות. השלך את הנוזל העליון, החזר את התאים לתמיסה במדיום טרי והעבר אותם לצלחות חדשות שכבר מכילות מדיום טרי.
Seeding density
1 x 104 תאים/סמ"ר
Fluid renewal
2 עד 3 פעמים בשבוע
Post-thaw recovery
לאחר ההפשרה, צלחת את התאים ב-5 x 104 תאים/סמ"ר והניח לתאים להתאושש מתהליך ההקפאה ולהידבק למשך 24 שעות לפחות.
Thawing and culturing
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Quality control and cryopreservation

Sterility

זיהום במיקופלסמה נשלל באמצעות בדיקות מבוססות PCR ושיטות זיהוי מיקופלסמה מבוססות לומניסצנציה.

כדי להבטיח שאין זיהום חיידקי, פטרייתי או שמרי, תרבויות התאים עוברות בדיקות ויזואליות יומיות.

Freeze medium
כמדיום לשימור בקירור, אנו משתמשים במדיום גידול מלא (כולל FBS) + 10% DMSO כדי להבטיח חיוניות נאותה לאחר ההפשרה, או CM-1 (מספר קטלוגי Cytion 800100), הכולל חומרים אוסמו-מגנים ומייצבי מטבוליזם משופרים כדי לשפר את ההתאוששות ולהפחית את הלחץ הנגרם מהקפאה.
Storage conditions

לשימור לטווח ארוך, יש להניח את הבקבוקונים בחנקן נוזלי במצב של אדי בטמפרטורה של כ-150 עד 196 מעלות צלזיוס. אחסון בטמפרטורה של 80 מעלות צלזיוס מקובל רק כצעד ביניים קצר לפני העברה לחנקן נוזלי.

Shipping conditions

שורות תאים שהוקפאו נשלחות בקרח יבש באריזה מאושרת ומבודדת עם כמות מספקת של חומר קירור כדי לשמור על טמפרטורה של כ-78°C- במהלך ההובלה. עם קבלת המשלוח, יש לבדוק את המכל מיד ולהעביר את הבקבוקונים ללא דיחוי לאחסון מתאים.

08Donor

Donor age
30 שנה
Ethnicity
אפרו-אמריקאי