Langsung ke isi
HK EB3-EGFP
Tisu
Serviks
Penyakit
Karsinoma
Sinonim
HeLa Kyoto EB3-EGFP, HeLa Kyoto EB3 EGFP, HeLa Kyoto EGFP-EB3

HK EB3-EGFP

Cell line · Nomor produk 300668

Hela Kyoto EB3-EGFP is a derivative of the HeLa Kyoto cell line, specifically engineered to express the End-Binding Protein 3 (EB3) tagged with Enhanced G...

€800.00belum termasuk pajak dan ongkos kirim
Stok menipis
Lot
Direkomendasikan (stok terbaru)
1

01Informasi umum

Deskripsi

Hela Kyoto EB3-EGFP adalah turunan dari lini sel HeLa Kyoto, yang secara khusus direkayasa untuk mengekspresikan End-Binding Protein 3 (EB3) yang ditandai dengan Enhanced Green Fluorescent Protein (EGFP). Lini sel ini umumnya digunakan dalam penelitian yang berfokus pada pemahaman dinamika mikrotubulus karena penandaan fluoresen EB3, protein yang berasosiasi dengan ujung plus mikrotubulus. Ekspresi EGFP memberikan penanda fluoresen yang memungkinkan visualisasi perilaku mikrotubulus secara real-time dalam sel hidup di bawah mikroskop fluoresensi.

Garis sel ini sangat berharga dalam biologi sel dan penelitian kanker, di mana memahami mekanisme pembelahan sel dan transportasi intraseluler sangat penting. Ekspresi EB3-EGFP yang stabil tidak mengganggu fungsi normal mikrotubulus, menjadikan sel-sel ini alat yang dapat diandalkan untuk studi terperinci tentang proses seluler yang bergantung pada dinamika mikrotubulus.

Tisu
Serviks
Penyakit
Karsinoma
Sinonim
  • HeLa Kyoto EB3-EGFP
  • HeLa Kyoto EB3 EGFP
  • HeLa Kyoto EGFP-EB3

02Klasifikasi

Organisme
Manusia
Seks
Perempuan
Sifat-sifat pertumbuhan
Pengikut
Status GMO
GMO-S1
Rincian status GMO
GMO-S1: This HeLa Kyoto EB3-EGFP line contains an EGFP-tagged EB3 construct for dynamic microtubule visualization. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Tingkat keamanan hayati
1

03Karakteristik

Morfologi
Sel mirip epitel dengan bentuk batu mosaik

04Pengidentifikasi

Referensi
HK EB3-EGFP (Nomor katalog Cytion 300668)
Nomor Identifikasi Pajak NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_1D61
Nasabah penyimpanan
Laboratorium Ellenberg (Ellenberg Lab) (EMBL)

05Ekspresi dan kerentanan

Ekspresi protein
MEGFP (protein pengikat ujung mikrotubulus 3 yang ditandai mEGFP): Lokasi / Gen: 1..589 / Pcmv, 652..1497 / EB3, 1516..2235 / EGFP, 3466..4260 / KanR / NeoR
Produk
Promotor CMV EB3, Neomisin, Fosfotransferase

06Penanganan dan budidaya

Media kultur
DMEM, w: 4,5 g/L Glukosa, w: 4 mM L-Glutamin, w: 3,7 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM Natrium piruvat (Nomor artikel Cytion 820300a)
Suasana inkubasi

37°C, 5%CO2, atmosfer yang dilembabkan.

Suplemen
Tambahkan media dengan 10% FBS
Reagen disosiasi
Accutase
Perbanyakan sel
Buang media lama dari sel yang melekat dan cuci dengan PBS yang tidak mengandung kalsium dan magnesium. Untuk labu T25, gunakan 3-5 ml PBS, dan untuk labu T75, gunakan 5-10 ml. Kemudian, tutupi sel sepenuhnya dengan Accutase, menggunakan 1-2 ml untuk labu T25 dan 2,5 ml untuk labu T75. Biarkan sel diinkubasi pada suhu kamar selama 8-10 menit untuk melepaskannya. Setelah inkubasi, campurkan sel secara perlahan dengan 10 ml medium untuk meresuspensi sel, kemudian sentrifugasi pada 300xg selama 3 menit. Buang supernatan, resuspensi sel dalam medium segar, dan pindahkan ke dalam labu baru yang sudah berisi medium segar.
Kepadatan penanaman
1 x 10⁴ sel/cm²
Pergantian cairan
2 hingga 3 kali per minggu
Pemulihan pasca-pencairan
Setelah dicairkan, tanam sel pada kepadatan 5 x 10⁴ sel/cm² dan biarkan sel pulih dari proses pembekuan serta menempel setidaknya selama 24 jam.
Pencairan dan pembiakan
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Pengendalian mutu dan kriopreservasi

Kemandulan

Kontaminasi mikoplasma disingkirkan dengan menggunakan tes berbasis PCR dan metode deteksi mikoplasma berbasis pendaran.

Untuk memastikan tidak ada kontaminasi bakteri, jamur, atau ragi, kultur sel menjalani inspeksi visual setiap hari.

Media pembekuan
Sebagai media kriopreservasi, kami menggunakan media pertumbuhan lengkap (termasuk FBS) + 10% DMSO untuk viabilitas pasca-pencairan yang memadai, atau CM-1 (nomor katalog Cytion 800100), yang mencakup osmoprotektan yang dioptimalkan dan penstabil metabolisme untuk meningkatkan pemulihan dan mengurangi stres yang diinduksi kriopreservasi.
Kondisi penyimpanan

Untuk pengawetan jangka panjang, tempatkan botol dalam nitrogen cair fase uap pada suhu sekitar -150 hingga -196 °C. Penyimpanan pada suhu -80 °C hanya dapat diterima sebagai langkah sementara sebelum dipindahkan ke nitrogen cair.

Ketentuan pengiriman

Lini sel kriopreservasi dikirim di atas es kering dalam kemasan terisolasi yang divalidasi dengan refrigeran yang cukup untuk mempertahankan suhu sekitar -78 ° C selama perjalanan. Setelah diterima, segera periksa wadah dan pindahkan botol tanpa penundaan ke tempat penyimpanan yang sesuai.

08Donatur

Usia donor
30 tahun
Etnis
Afrika-Amerika