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HK EB3-EGFP
Gewebe
Gebärmutterhals
Krankheit
Karzinom
Synonyme
HeLa Kyoto EB3-EGFP, HeLa Kyoto EB3 EGFP, HeLa Kyoto EGFP-EB3

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HK EB3-EGFP

Cell line · Artikelnummer 300668

Hela Kyoto EB3-EGFP is a derivative of the HeLa Kyoto cell line, specifically engineered to express the End-Binding Protein 3 (EB3) tagged with Enhanced G...

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01Allgemeine Informationen

Beschreibung

Hela Kyoto EB3-EGFP ist ein Derivat der HeLa Kyoto-Zelllinie, das speziell für die Expression des End-Binding Protein 3 (EB3), das mit Enhanced Green Fluorescent Protein (EGFP) markiert ist, entwickelt wurde. Diese Zelllinie wird häufig in der Forschung zum Verständnis der Mikrotubuli-Dynamik eingesetzt, da EB3, ein Protein, das mit den Plus-Enden der Mikrotubuli assoziiert ist, fluoreszierend markiert ist. Die Expression von EGFP stellt einen Fluoreszenzmarker dar, der die Echtzeit-Visualisierung des Mikrotubuli-Verhaltens in lebenden Zellen unter einem Fluoreszenzmikroskop ermöglicht.

Diese Zelllinie ist besonders wertvoll für die Zellbiologie und Krebsforschung, wo das Verständnis der Mechanismen der Zellteilung und des intrazellulären Transports entscheidend ist. Die stabile Expression von EB3-EGFP beeinträchtigt die normalen Funktionen der Mikrotubuli nicht, was diese Zellen zu einem zuverlässigen Werkzeug für detaillierte Studien zellulärer Prozesse macht, die von der Dynamik der Mikrotubuli abhängen.

Gewebe
Gebärmutterhals
Krankheit
Karzinom
Synonyme
  • HeLa Kyoto EB3-EGFP
  • HeLa Kyoto EB3 EGFP
  • HeLa Kyoto EGFP-EB3

02Klassifizierung

Organismus
Mensch
Sex
Weiblich
Wachstumseigenschaften
Anhänger
GVO-Status
GMO-S1
Angaben zum GVO-Status
GMO-S1: This HeLa Kyoto EB3-EGFP line contains an EGFP-tagged EB3 construct for dynamic microtubule visualization. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Biologische Sicherheitsstufe
1

03Merkmale

Morphologie
Epithelähnliche Zellen mit mosaikartiger Steinform

04Bezeichner

Quellenangabe
HK EB3-EGFP (Cytion Katalognummer 300668)
NCBI-Steuer-ID
9606
Cellosaurus
CVCL_1D61
Einleger
Das Ellenberg-Labor (EMBL)

05Expression und Anfälligkeit

Proteinexpression
MEGFP (microtubule End-binding protein 3 mEGFP tagged): Standort/Gen: 1..589 / Pcmv, 652..1497 / EB3, 1516..2235 / EGFP, 3466..4260 / KanR/NeoR
Produkte
CMV-Promotor EB3, Neomycin, Phosphotransferase

06Handhabung und Kultur

Nährmedium
DMEM, w: 4,5 g/L Glucose, w: 4 mM L-Glutamin, w: 3,7 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM Natriumpyruvat (Cytion-Artikelnummer 820300a)
Inkubationsatmosphäre

37°C, 5%CO2, befeuchtete Atmosphäre.

Nahrungsergänzungsmittel
Ergänzen Sie das Medium mit 10% FBS
Dissoziationsreagenz
Accutase
Subkultivierung
Entfernen Sie das alte Medium von den adhärenten Zellen und waschen Sie sie mit PBS, das kein Kalzium und Magnesium enthält. Für T25-Kolben 3-5 ml PBS und für T75-Kolben 5-10 ml verwenden. Anschließend werden die Zellen vollständig mit Accutase bedeckt, wobei 1-2 ml für T25-Kolben und 2,5 ml für T75-Kolben verwendet werden. Lassen Sie die Zellen 8-10 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren, um sie abzulösen. Nach der Inkubation mischen Sie die Zellen vorsichtig mit 10 ml Medium, um sie zu resuspendieren, und zentrifugieren sie dann 3 Minuten lang bei 300xg. Den Überstand verwerfen, die Zellen in frischem Medium resuspendieren und in neue Kolben überführen, die bereits frisches Medium enthalten.
Aussaatdichte
1 x 104 Zellen/cm²
Flüssigkeitswechsel
2 bis 3 Mal pro Woche
Erholung nach dem Auftauen
Nach dem Auftauen die Zellen mit einer Dichte von 5 x 104 Zellen/cm² ausplattieren und die Zellen mindestens 24 Stunden lang vom Gefrierprozess erholen und adhärieren lassen.
Auftauen und Kultivierung
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Qualitätskontrolle und Kryokonservierung

Sterilität

Eine Kontamination mit Mykoplasmen wird sowohl durch PCR-basierte Assays als auch durch lumineszenzbasierte Mykoplasmen-Nachweisverfahren ausgeschlossen.

Um sicherzustellen, dass keine Kontamination mit Bakterien, Pilzen oder Hefen vorliegt, werden die Zellkulturen täglich visuell überprüft.

Gefriermedium
Als Kryokonservierungsmedium verwenden wir komplettes Wachstumsmedium (einschließlich FBS) + 10 % DMSO für eine angemessene Lebensfähigkeit nach dem Auftauen oder CM-1 (Cytion Katalognummer 800100), das optimierte Osmoprotektoren und Stoffwechselstabilisatoren enthält, um die Erholung zu verbessern und kryoinduzierten Stress zu reduzieren.
Lagerbedingungen

Zur Langzeitkonservierung werden die Fläschchen in flüssigem Stickstoff bei etwa -150 bis -196 °C gelagert. Eine Lagerung bei -80 °C ist nur als kurzer Zwischenschritt vor der Überführung in flüssigen Stickstoff akzeptabel.

Versandbedingungen

Kryokonservierte Zelllinien werden auf Trockeneis in einer validierten, isolierten Verpackung mit ausreichend Kühlmittel versandt, um während des gesamten Transports eine Temperatur von etwa -78 °C aufrechtzuerhalten. Prüfen Sie den Behälter bei Erhalt sofort und bringen Sie die Fläschchen unverzüglich in ein geeignetes Lager.

08Spender

Alter des Spenders
30 Jahre
Ethnische Zugehörigkeit
Afroamerikaner