HK EGFP-Alpha-Tubulin/H2B-mCherry

Die HK EGFP-alpha-Tubulin/H2B-mCherry HeLa Kyoto-Zelllinie ist ein sorgfältig entwickeltes Modell zur detaillierten Visualisierung zellulärer Prozesse. Diese klonale Linie wurde stabil transfiziert, um zwei fluoreszierende Proteinfusionen zu exprimieren, die eine Echtzeit-Darstellung sowohl des Chromatins als auch des Mikrotubuli-Netzwerks ermöglichen. Das rot fluoreszierende Protein mCherry ist mit dem Histon-Kernprotein H2B fusioniert, wodurch H2B-mCherry entsteht. Dieses Fusionsprotein wird vom pH2B-mCherry-IRES-neo3-Plasmid exprimiert und dient als Chromatinmarker, der die Kern-DNA bei der Bildgebung in lebenden Zellen hervorhebt und Untersuchungen zur Chromatindynamik und Kernarchitektur erleichtert.

Zusätzlich exprimiert diese Zelllinie monomeres verstärktes GFP (Green Fluorescent Protein), das mit α-Tubulin fusioniert ist und über das pmEGFP-α-Tubulin-IRES-puro2b-Plasmid eingeführt wurde. Die GFP-α-Tubulin-Fusion liefert eine lebhafte grüne Fluoreszenz, die die Mikrotubuli-Strukturen in der Zelle erkennen lässt. Diese Eigenschaft ist entscheidend für die Untersuchung der Mikrotubuli-Organisation und -Dynamik sowie ihrer Rolle bei der Zellteilung und dem intrazellulären Transport. Die stabile Integration dieser Konstrukte ermöglicht eine kontinuierliche Langzeitbeobachtung dieser zellulären Komponenten, ohne dass eine wiederholte Transfektion erforderlich ist, wodurch die Variabilität verringert und die Zuverlässigkeit der Versuchsergebnisse erhöht wird. Die Selektion auf Medikamentenresistenz nach der Transfektion gewährleistet die Stabilität und Einheitlichkeit der Expression in den Zellen dieser Linie.

37°C, 5%_CO2, befeuchtete Atmosphäre.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Eine Kontamination mit Mykoplasmen wird sowohl durch PCR-basierte Assays als auch durch lumineszenzbasierte Mykoplasmen-Nachweisverfahren ausgeschlossen.

Um sicherzustellen, dass keine Kontamination mit Bakterien, Pilzen oder Hefen vorliegt, werden die Zellkulturen täglich visuell überprüft.

Zur Langzeitkonservierung werden die Fläschchen in flüssigem Stickstoff bei etwa -150 bis -196 °C gelagert. Eine Lagerung bei -80 °C ist nur als kurzer Zwischenschritt vor der Überführung in flüssigen Stickstoff akzeptabel.

Kryokonservierte Zelllinien werden auf Trockeneis in einer validierten, isolierten Verpackung mit ausreichend Kühlmittel versandt, um während des gesamten Transports eine Temperatur von etwa -78 °C aufrechtzuerhalten. Prüfen Sie den Behälter bei Erhalt sofort und bringen Sie die Fläschchen unverzüglich in ein geeignetes Lager.

Bei Cytion stehen wir hinter der Qualität und Lebensfähigkeit unserer Produkte. Wir garantieren, dass unsere Zellen zu Beginn der Kultur für 60 Tage nach dem Versand aus unseren Einrichtungen lebensfähig sind. Wir versichern, dass alle Materialien mit den im Analysezertifikat und/oder Produktblatt beschriebenen Spezifikationen übereinstimmen

Ausführliche Informationen finden Sie in unserer <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garantieerklärung