HK EGFP-alfa-tubulina/H2B-mCherry

La línea celular HK EGFP-alfa-tubulina/H2B-mCherry HeLa Kyoto es un modelo meticulosamente diseñado para la visualización detallada de los procesos celulares. Esta línea clonal ha sido transfectada de forma estable para expresar dos fusiones de proteínas fluorescentes que permiten obtener imágenes en tiempo real tanto de la cromatina como de la red microtubular. La proteína fluorescente roja mCherry se fusiona con la proteína histona central H2B, creando H2B-mCherry. Esta proteína de fusión se expresa a partir del plásmido pH2B-mCherry-IRES-neo3 y sirve como marcador de cromatina, resaltando el ADN nuclear en las imágenes de células vivas y facilitando los estudios sobre la dinámica de la cromatina y la arquitectura nuclear.

Además, esta línea celular expresa GFP (proteína verde fluorescente) monomérica mejorada fusionada a α-tubulina, introducida mediante el plásmido pmEGFP-α-tubulina-IRES-puro2b. La fusión GFP-α-tubulina proporciona una fluorescencia verde intensa que delinea las estructuras microtubulares dentro de la célula. Esta característica es crucial para estudiar la organización y dinámica de los microtúbulos y su papel en la división celular y el transporte intracelular. La integración estable de estas construcciones permite la observación continua y a largo plazo de estos componentes celulares sin necesidad de repetir la transfección, reduciendo así la variabilidad y aumentando la fiabilidad de los resultados experimentales. La selección de la resistencia a fármacos tras la transfección garantiza la estabilidad y uniformidad de expresión entre las células de esta línea.

37°C, 5%_CO2, atmósfera humidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

La contaminación por micoplasma se excluye utilizando tanto ensayos basados en la PCR como métodos de detección de micoplasma basados en la luminiscencia.

Para garantizar la ausencia de contaminación bacteriana, fúngica o por levaduras, los cultivos celulares se someten a inspecciones visuales diarias.

Para la conservación a largo plazo, colocar los viales en nitrógeno líquido en fase vapor a una temperatura aproximada de -150 a -196 °C. El almacenamiento a -80 °C sólo es aceptable como breve paso intermedio antes de la transferencia al nitrógeno líquido.

Las líneas celulares crioconservadas se envían en hielo seco en envases validados y aislados con suficiente refrigerante para mantener aproximadamente -78 °C durante el tránsito. A la recepción, inspeccione el envase inmediatamente y transfiera los viales sin demora al almacenamiento adecuado.

En Cytion, respaldamos la calidad y viabilidad de nuestros productos. Garantizamos que nuestras células serán viables al inicio del cultivo durante los 60 días posteriores al envío desde nuestras instalaciones. Aseguramos que todos los materiales se ajustan a las especificaciones descritas en el Certificado de Análisis y/o Hoja de Producto

Para más información, consulte nuestra <a href=""/Quiénes somos/Garantía/"" hreflang=""x-default"">Declaración de garantía