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HK EGFP-Cap-D2
Pañuelo de papel
Cérvix
Enfermedad
Carcinoma
Sinónimos
HeLa Kyoto EGFP CAP-D2, HeLa Kyoto Cap-D2 EGFP

Documentos

HK EGFP-Cap-D2

Cell line · Número de producto 300675

The HK EGFP-Cap-D2 cell line is an engineered variant of Hela Kyoto cells, specifically designed for advanced research in cellular biology and genetic eng...

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01Información general

Descripción

La línea celular HK EGFP-Cap-D2 es una variante manipulada de las células Hela Kyoto, diseñada específicamente para la investigación avanzada en biología celular e ingeniería genética. Esta línea celular expresa la proteína verde fluorescente mejorada (EGFP) fusionada al extremo C-terminal del receptor dopaminérgico D2, lo que permite la visualización de la dinámica y distribución del receptor en tiempo real mediante microscopía de fluorescencia. Esta característica es especialmente beneficiosa para estudiar el tráfico de receptores, las vías de señalización y los efectos de los agentes farmacológicos en el comportamiento del receptor D2.

Estas células se utilizan ampliamente en la investigación neurológica para comprender mejor los mecanismos subyacentes a la señalización de la dopamina, que es crucial en muchos trastornos neurológicos como la enfermedad de Parkinson, la esquizofrenia y la depresión. La fusión de EGFP con el receptor D2 no afecta a la función normal del receptor ni a su localización celular, lo que convierte al HK EGFP-Cap-D2 en una valiosa herramienta para estudios fisiológicos y patológicos. La expresión estable de EGFP también permite realizar estudios longitudinales en células vivas, proporcionando información sobre los procesos dinámicos de regulación del receptor y la interacción con otros componentes celulares.

Pañuelo de papel
Cérvix
Enfermedad
Carcinoma
Sinónimos
  • HeLa Kyoto EGFP CAP-D2
  • HeLa Kyoto Cap-D2 EGFP

02Clasificación

Organismo
Humano
Sexo
Mujer
Propiedades de crecimiento
Adherente
Situación respecto a los OMG
GMO-S1
Detalles sobre la presencia de OMG
GMO-S1: This HeLa Kyoto line contains an EGFP-Cap-D2 construct enabling live-cell studies of condensin-II dynamics. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Nivel de bioseguridad
1

03Características

Morfología
Células de aspecto epitelial con forma de piedra en mosaico

04Identificadores

Referencia
HK EGFP-Cap-D2 (número de catálogo de Cytion 300675)
N.º de identificación fiscal del NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_1D60
Depositario
Laboratorio Ellenberg (EMBL)

05Expresión y susceptibilidad

Expresión de proteínas
EGFP-CAP-D2, Alrededor del 80% de las células muestran expresión: Localización/Gen: 1..589 / Pcmv, 619..645 / Flag-tag, 646..660, 1375..1389/null, 661..1374 / EGFP, 1435..5638/CAP-D2, 6886..7680/KanR/NeoR
Productos
Promotor CMV, octapéptido FLAG, enlazador glicina, neomicina, fosfotransferasa

06Manejo y cultivo

Medio de cultivo
DMEM, w: 4,5 g/L de glucosa, w: 4 mM de L-glutamina, w: 3,7 g/L de NaHCO3, w: 1,0 mM de piruvato sódico (número de artículo de Cytion 820300a)
Atmósfera de incubación

37°C, 5%CO2, atmósfera humidificada.

Suplementos
Complementar el medio con un 10% de FBS
Reactivo de disociación
Accutase
Subcultivo
Retire el medio antiguo de las células adheridas y lávelas con PBS que carezca de calcio y magnesio. Para matraces T25, utilice 3-5 ml de PBS, y para matraces T75, utilice 5-10 ml. A continuación, cubra completamente las células con Accutase, utilizando 1-2 ml para matraces T25 y 2,5 ml para matraces T75. Deje incubar las células a temperatura ambiente durante 8-10 minutos para desprenderlas. Tras la incubación, mezclar suavemente las células con 10 ml de medio para resuspenderlas y, a continuación, centrifugar a 300xg durante 3 minutos. Desechar el sobrenadante, resuspender las células en medio fresco y transferirlas a nuevos matraces que ya contengan medio fresco.
Densidad de siembra
1 x 104 células/cm2
Renovación de fluidos
de 2 a 3 veces por semana
Recuperación tras la descongelación
Después de descongelar, siembre las células a 5 x 104 células/cm2 y deje que las células se recuperen del proceso de congelación y se adhieran durante al menos 24 horas.
Descongelación y cultivo
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Control de calidad y criopreservación

Esterilidad

La contaminación por micoplasma se excluye utilizando tanto ensayos basados en la PCR como métodos de detección de micoplasma basados en la luminiscencia.

Para garantizar la ausencia de contaminación bacteriana, fúngica o por levaduras, los cultivos celulares se someten a inspecciones visuales diarias.

Medio de congelación
Como medio de criopreservación, utilizamos el medio de crecimiento completo (incluido FBS) + 10% DMSO para una viabilidad adecuada tras la descongelación, o CM-1 (número de catálogo 800100 de Cytion), que incluye osmoprotectores optimizados y estabilizadores metabólicos para mejorar la recuperación y reducir el estrés crioinducido.
Condiciones de almacenamiento

Para la conservación a largo plazo, colocar los viales en nitrógeno líquido en fase vapor a una temperatura aproximada de -150 a -196 °C. El almacenamiento a -80 °C sólo es aceptable como breve paso intermedio antes de la transferencia al nitrógeno líquido.

Condiciones de envío

Las líneas celulares crioconservadas se envían en hielo seco en envases validados y aislados con suficiente refrigerante para mantener aproximadamente -78 °C durante el tránsito. A la recepción, inspeccione el envase inmediatamente y transfiera los viales sin demora al almacenamiento adecuado.

08Donante

Edad del donante
30 años
Origen étnico
Afroamericanos