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HK EGFP-Cap-D2
Tissue
Cuello uterino
Disease
Carcinoma
Synonyms
HeLa Kyoto EGFP CAP-D2, HeLa Kyoto Cap-D2 EGFP

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HK EGFP-Cap-D2

Cell line · Product number 300675

The HK EGFP-Cap-D2 cell line is an engineered variant of Hela Kyoto cells, specifically designed for advanced research in cellular biology and genetic eng...

US$800.00excl. tax and shipping
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Recommended (freshest lot)
1

01General information

Description

La línea celular HK EGFP-Cap-D2 es una variante modificada genéticamente de las células Hela Kyoto, diseñada específicamente para la investigación avanzada en biología celular e ingeniería genética. Esta línea celular expresa la proteína fluorescente verde mejorada (EGFP) fusionada al extremo C-terminal del receptor de dopamina D2, lo que permite visualizar la dinámica y la distribución del receptor en tiempo real mediante microscopía de fluorescencia. Esta característica resulta particularmente útil para estudiar el tráfico de receptores, las vías de señalización y los efectos de los agentes farmacológicos sobre el comportamiento del receptor D2.

Estas células se utilizan ampliamente en la investigación neurológica para comprender mejor los mecanismos subyacentes a la señalización de la dopamina, que es crucial en muchos trastornos neurológicos como la enfermedad de Parkinson, la esquizofrenia y la depresión. La fusión de la EGFP con el receptor D2 no afecta la función normal del receptor ni su localización celular, lo que convierte a HK EGFP-Cap-D2 en una herramienta valiosa para estudios fisiológicos y patológicos. La expresión estable de la EGFP también permite realizar estudios longitudinales en células vivas, lo que brinda información sobre los procesos dinámicos de regulación del receptor y su interacción con otros componentes celulares.

Tissue
Cuello uterino
Disease
Carcinoma
Synonyms
  • HeLa Kyoto EGFP CAP-D2
  • HeLa Kyoto Cap-D2 EGFP

02Classification

Organism
Human
Sex
Female
Growth properties
Adherent
GMO status
GMO-S1
GMO status details
GMO-S1: This HeLa Kyoto line contains an EGFP-Cap-D2 construct enabling live-cell studies of condensin-II dynamics. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Biosafety level
1

03Characteristics

Morphology
Células de tipo epitelial con forma de piedra en mosaico

04Identifiers

Citation
HK EGFP-Cap-D2 (número de catálogo de Cytion 300675)
NCBI TaxID
9606
Cellosaurus
CVCL_1D60
Depositor
El Laboratorio Ellenberg (EMBL)

05Expression and susceptibility

Protein expression
EGFP-CAP-D2, Aproximadamente el 80 % de las células muestran expresión: Ubicación/Gen: 1..589 / Pcmv, 619..645 / etiqueta Flag, 646..660, 1375..1389/nulo, 661..1374 / EGFP, 1435..5638/CAP-D2, 6886..7680/KanR/NeoR
Products
Promotor del CMV, octapéptido FLAG, enlazador de glicina, neomicina, fosfotransferasa

06Handling and culture

Culture medium
DMEM, p/v: 4,5 g/L de glucosa, p/v: 4 mM de L-glutamina, p/v: 3,7 g/L de NaHCO₃, p/v: 1,0 mM de piruvato de sodio (número de artículo de Cytion 820300a)
Incubation atmosphere

37 °C, 5 % de CO₂, atmósfera humidificada.

Supplements
Añade al medio un 10 % de FBS
Dissociation reagent
Accutase
Subculturing
Retira el medio usado de las células adheridas y lávalas con PBS sin calcio ni magnesio. Para los frascos T25, usa de 3 a 5 ml de PBS, y para los frascos T75, usa de 5 a 10 ml. Luego, cubra las células por completo con Accutase, utilizando de 1 a 2 ml para los frascos T25 y 2,5 ml para los frascos T75. Deje que las células se incuben a temperatura ambiente durante 8 a 10 minutos para desprenderse. Después de la incubación, mezcla suavemente las células con 10 ml de medio para resuspendarlas; luego, centrifuga a 300xg durante 3 minutos. Deseche el sobrenadante, resuspenda las células en medio fresco y transfiéralas a frascos nuevos que ya contengan medio fresco.
Seeding density
1 x 10⁴ células/cm²
Fluid renewal
De 2 a 3 veces por semana
Post-thaw recovery
Después de descongelarlas, siembre las células a una densidad de 5 × 10⁴ células/cm² y deje que se recuperen del proceso de congelación y se adhieran durante al menos 24 horas.
Thawing and culturing
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Quality control and cryopreservation

Sterility

Se descarta la contaminación por micoplasmas mediante ensayos basados en PCR y métodos de detección de micoplasmas basados en luminiscencia.

Para garantizar que no haya contaminación bacteriana, fúngica o por levaduras, los cultivos celulares se someten a inspecciones visuales diarias.

Freeze medium
Como medio de criopreservación, utilizamos un medio de crecimiento completo (que incluye FBS) + 10 % de DMSO para garantizar una viabilidad adecuada tras la descongelación, o CM-1 (número de catálogo de Cytion 800100), que incluye osmoprotectores y estabilizadores metabólicos optimizados para mejorar la recuperación y reducir el estrés inducido por la criopreservación.
Storage conditions

Para la conservación a largo plazo, coloque los viales en nitrógeno líquido en fase de vapor a una temperatura de entre −150 y −196 °C, aproximadamente. El almacenamiento a −80 °C solo es aceptable como un paso intermedio breve antes de transferirlos al nitrógeno líquido.

Shipping conditions

Las líneas celulares criopreservadas se envían en hielo seco, en un embalaje aislante validado que contiene suficiente refrigerante para mantener una temperatura de aproximadamente −78 °C durante todo el transporte. Al recibir el envío, revise el contenedor de inmediato y traslade los viales sin demora al lugar de almacenamiento adecuado.

08Donor

Donor age
30 años
Ethnicity
Afroamericano