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HK EGFP-Cap-D2
Tissu
Col de l'utérus
Maladie
Carcinome
Synonymes
HeLa Kyoto EGFP CAP-D2, HeLa Kyoto Cap-D2 EGFP

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HK EGFP-Cap-D2

Cell line · Référence du produit 300675

The HK EGFP-Cap-D2 cell line is an engineered variant of Hela Kyoto cells, specifically designed for advanced research in cellular biology and genetic eng...

€800.00hors taxes et frais de port
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Lot
Recommandé (lot le plus récent)
1

01Informations générales

Description

La lignée cellulaire HK EGFP-Cap-D2 est une variante des cellules Hela Kyoto, spécialement conçue pour la recherche avancée en biologie cellulaire et en génie génétique. Cette lignée cellulaire exprime une protéine fluorescente verte améliorée (EGFP) fusionnée à l'extrémité C-terminale du récepteur dopaminergique D2, ce qui permet de visualiser la dynamique et la distribution des récepteurs en temps réel au microscope à fluorescence. Cette caractéristique est particulièrement utile pour étudier le trafic des récepteurs, les voies de signalisation et les effets des agents pharmacologiques sur le comportement des récepteurs D2.

Ces cellules sont largement utilisées dans la recherche neurologique pour mieux comprendre les mécanismes sous-jacents à la signalisation de la dopamine, qui est cruciale dans de nombreux troubles neurologiques tels que la maladie de Parkinson, la schizophrénie et la dépression. La fusion de l'EGFP au récepteur D2 n'affecte pas la fonction normale du récepteur ni sa localisation cellulaire, ce qui fait de HK EGFP-Cap-D2 un outil précieux pour les études physiologiques et pathologiques. L'expression stable de l'EGFP permet également des études longitudinales dans des cellules vivantes, ce qui donne un aperçu des processus dynamiques de régulation du récepteur et de son interaction avec d'autres composants cellulaires.

Tissu
Col de l'utérus
Maladie
Carcinome
Synonymes
  • HeLa Kyoto EGFP CAP-D2
  • HeLa Kyoto Cap-D2 EGFP

02Classification

Organisme
Humain
Sexe
Femme
Propriétés de croissance
Adepte
Statut OGM
GMO-S1
Informations détaillées sur le statut OGM
GMO-S1: This HeLa Kyoto line contains an EGFP-Cap-D2 construct enabling live-cell studies of condensin-II dynamics. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Niveau de biosécurité
1

03Caractéristiques

Morphologie
Cellules de type épithélial avec une forme de pierre en mosaïque

04Identifiants

Référence
HK EGFP-Cap-D2 (numéro de catalogue Cytion 300675)
Numéro d'identification fiscale NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_1D60
Déposant
Le laboratoire Ellenberg (EMBL)

05Expression et sensibilité

Expression des protéines
EGFP-CAP-D2, Environ 80% des cellules montrent une expression : Localisation/Gène : 1..589 / Pcmv, 619..645 / Flag-tag, 646..660, 1375..1389/null, 661..1374 / EGFP, 1435..5638/CAP-D2, 6886..7680/KanR/NeoR
Produits
Promoteur CMV, octapeptide FLAG, linker Glycine, Néomycine, Phosphotransférase

06Manipulation et culture

Milieu de culture
DMEM, w : 4.5 g/L Glucose, w : 4 mM L-Glutamine, w : 3.7 g/L NaHCO3, w : 1.0 mM Pyruvate de sodium (numéro d'article Cytion 820300a)
Atmosphère d'incubation

37°C, 5%CO2, atmosphère humidifiée.

Compléments alimentaires
Compléter le milieu avec 10% de FBS
Réactif de dissociation
Accutase
Repiquage
Retirer l'ancien milieu des cellules adhérentes et les laver avec du PBS dépourvu de calcium et de magnésium. Pour les flacons T25, utiliser 3-5 ml de PBS, et pour les flacons T75, 5-10 ml. Ensuite, recouvrir complètement les cellules avec Accutase, en utilisant 1 à 2 ml pour les flacons T25 et 2,5 ml pour les flacons T75. Laisser les cellules incuber à température ambiante pendant 8-10 minutes pour les détacher. Après incubation, mélanger délicatement les cellules avec 10 ml de milieu pour les remettre en suspension, puis centrifuger à 300xg pendant 3 minutes. Jeter le surnageant, remettre les cellules en suspension dans du milieu frais et les transférer dans de nouveaux flacons contenant déjà du milieu frais.
Densité de semis
1 x 104 cellules/cm2
Renouvellement des fluides
2 à 3 fois par semaine
Récupération après le dégel
Après décongélation, ensemencer les cellules à raison de 5 x 104 cellules/cm2 et laisser les cellules se remettre du processus de congélation et adhérer pendant au moins 24 heures.
Décongélation et mise en culture
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Contrôle qualité et cryoconservation

Stérilité

La contamination par les mycoplasmes est exclue à l'aide de tests basés sur la PCR et de méthodes de détection des mycoplasmes basées sur la luminescence.

Pour s'assurer de l'absence de contamination bactérienne, fongique ou levurienne, les cultures cellulaires font l'objet d'inspections visuelles quotidiennes.

Milieu de congélation
Comme milieu de cryoconservation, nous utilisons un milieu de croissance complet (comprenant du FBS) + 10 % de DMSO pour une viabilité adéquate après décongélation, ou CM-1 (numéro de catalogue 800100 de Cytion), qui comprend des osmoprotectants et des stabilisateurs métaboliques optimisés pour améliorer la récupération et réduire le stress induit par la cryogénisation.
Conditions de stockage

Pour une conservation à long terme, placer les flacons dans de l'azote liquide en phase vapeur à une température comprise entre -150 et -196 °C environ. Le stockage à -80 °C n'est acceptable qu'en tant qu'étape intermédiaire de courte durée avant le transfert dans l'azote liquide.

Conditions de livraison

Les lignées cellulaires cryoconservées sont expédiées sur glace sèche dans des emballages isolés et validés, avec suffisamment de réfrigérant pour maintenir une température d'environ -78 °C tout au long du transport. À la réception, inspecter immédiatement le conteneur et transférer sans délai les flacons dans un lieu de stockage approprié.

08Donateur

Âge du donneur
30 ans
Origine ethnique
Afro-américain