Pāriet uz saturu
HK EGFP-Cap-D2
Audums
Dzemdes kakls
Slimība
Karcinoma
Sinonīmi
HeLa Kyoto EGFP CAP-D2, HeLa Kyoto Cap-D2 EGFP

Dokumenti

HK EGFP-Cap-D2

Cell line · Preces numurs 300675

The HK EGFP-Cap-D2 cell line is an engineered variant of Hela Kyoto cells, specifically designed for advanced research in cellular biology and genetic eng...

€800.00bez nodokļa un piegādes izmaksām
Noliktavā
Lot
Ieteicams (jaunākā partija)
1

01Vispārīga informācija

Apraksts

HK EGFP-Cap-D2 šūnu līnija ir Hela Kyoto šūnu modificēts variants, kas īpaši izstrādāts progresīviem pētījumiem šūnu bioloģijā un gēnu inženierijā. Šī šūnu līnija ekspresē pastiprinātu zaļo fluorescējošo proteīnu (EGFP), kas sapludināts ar D2 dopamīna receptora C-galu, ļaujot vizualizēt receptoru dinamiku un izplatību reāllaikā fluorescences mikroskopijā. Šī īpašība ir īpaši noderīga, pētot receptoru apriti, signalizācijas ceļus un farmakoloģisko līdzekļu ietekmi uz D2 receptoru uzvedību.

Šīs šūnas tiek plaši izmantotas neiroloģiskajos pētījumos, lai labāk izprastu mehānismus, kas ir dopamīna signalizācijas pamatā, kas ir būtiski daudzu neiroloģisku traucējumu, piemēram, Parkinsona slimības, šizofrēnijas un depresijas, gadījumā. EGFP saplūšana ar D2 receptoru neietekmē receptora normālo funkciju vai tā lokalizāciju šūnās, padarot HK EGFP-Cap-D2 par vērtīgu instrumentu fizioloģiskiem un patoloģiskiem pētījumiem. Stabila EGFP ekspresija ļauj veikt arī ilgstošus pētījumus dzīvās šūnās, sniedzot ieskatu dinamiskajos receptora regulācijas procesos un mijiedarbībā ar citiem šūnu komponentiem.

Audums
Dzemdes kakls
Slimība
Karcinoma
Sinonīmi
  • HeLa Kyoto EGFP CAP-D2
  • HeLa Kyoto Cap-D2 EGFP

02Klasifikācija

Organisms
Cilvēks
Sekss
Sieviete
Augšanas īpašības
Atbalstītājs
ĢMO statuss
GMO-S1
Sīkāka informācija par ĢMO statusu
GMO-S1: This HeLa Kyoto line contains an EGFP-Cap-D2 construct enabling live-cell studies of condensin-II dynamics. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Bioloģiskās drošības līmenis
1

03Raksturlielumi

Morfoloģija
Epitēlijveidīgas šūnas ar mozaīkveida akmens formu

04Identifikatori

Atsauce
HK EGFP-Cap-D2 (Cytion kataloga numurs 300675)
NCBI nodokļu identifikācijas numurs
9606
Cellosaurus
CVCL_1D60
noguldītājs
Ellenberga laboratorija (EMBL)

05Pazīmes un uzņēmība

Proteīnu ekspresija
EGFP-CAP-D2, aptuveni 80 % šūnu ir izteiktas: Atrašanās vieta/gēns: 1..589 / Pcmv, 619..645 / Flag-tag, 646..660, 1375..1389/null, 661..1374 / EGFP, 1435..5638/CAP-D2, 6886..7680/KanR/NeoR
Produkti
CMV Promotors, FLAG oktapeptīds, glicīna saistviela, neomicīns, fosfotransferāze

06Apstrāde un audzēšana

Barotne
DMEM, w: 4,5 g/l glikozes, w: 4 mM L-glutamīna, w: 3,7 g/l NaHCO3, w: 1,0 mM nātrija piruvāta (Cytion izstrādājuma numurs 820300a)
Inkubācijas vide

37°C, 5%CO2, mitrināta atmosfēra.

Papildinājumi
Papildināt barotni ar 10% FBS
Disociācijas reaģents
Accutase
Pārstādīšana
Noņemt veco barotni no pielipušajām šūnām un mazgāt tās ar PBS, kurā nav kalcija un magnija. T25 kolbām izmantojiet 3-5 ml PBS, bet T75 kolbām - 5-10 ml. Pēc tam pilnībā pārklājiet šūnas ar Accutase, izmantojot 1-2 ml T25 kolbām un 2,5 ml T75 kolbām. Ļaujiet šūnām inkubēties istabas temperatūrā 8-10 minūtes, lai tās atdalītos. Pēc inkubācijas uzmanīgi samaisiet šūnas ar 10 ml barotnes, lai tās atkārtoti suspendētu, pēc tam centrifugējiet 3 minūtes ar 300xg. Izmetiet supernatantu, atkārtoti suspendējiet šūnas svaigā barotnē un pārvietojiet tās jaunās kolbās, kurās jau ir svaiga barotne.
Sēšanas blīvums
1 x 104 šūnas/cm2
Šķidruma atjaunošana
2 līdz 3 reizes nedēļā
Atgūšanās pēc atkusņa
Pēc atkausēšanas izkliedējiet šūnas uz šķīvja ar blīvumu 5 x 104 šūnas/cm2 un ļaujiet šūnām atgūties no sasaldēšanas procesa un pielipt vismaz 24 stundas.
Atkausēšana un kultivēšana
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kvalitātes kontrole un kriokonservācija

Sterilitāte

Mikoplazmas piesārņojums tiek izslēgts, izmantojot gan uz PCR balstītus testus, gan uz luminiscenci balstītas mikoplazmas noteikšanas metodes.

Lai pārliecinātos, ka nav baktēriju, sēnīšu vai rauga piesārņojuma, šūnu kultūras katru dienu vizuāli pārbauda.

Saldēšanas barotne
Kā kriokonservēšanas barotni mēs izmantojam pilnvērtīgu augšanas barotni (ieskaitot FBS) + 10 % DMSO, lai nodrošinātu pietiekamu dzīvotspēju pēc atkausēšanas, vai CM-1 (Cytion kataloga numurs 800100), kas ietver optimizētus osmoprotektorus un metaboliskos stabilizatorus, lai uzlabotu atveseļošanos un samazinātu krioinducēto stresu.
Uzglabāšanas nosacījumi

Ilgstošai uzglabāšanai flakonus ievietojiet šķidrā slāpeklī ar tvaika fāzi aptuveni -150 līdz -196 °C temperatūrā. Uzglabāšana -80 °C temperatūrā ir pieļaujama tikai kā īss starpposms pirms pārvietošanas uz šķidro slāpekli.

Piegādes nosacījumi

Kriokonservētas šūnu līnijas tiek sūtītas uz sausā ledus apstiprinātā, izolētā iepakojumā ar pietiekamu dzesēšanas šķidruma daudzumu, lai visā transportēšanas laikā uzturētu aptuveni -78 °C temperatūru. Pēc saņemšanas nekavējoties pārbaudiet iepakojumu un nekavējoties pārvietojiet flakonus uz atbilstošu uzglabāšanas vietu.

08Ziedotājs

Donora vecums
30 gadi
Etniskā piederība
Afroamerikānis