Pāriet uz saturu
HK EGFP-H2B
Audums
Dzemdes kakls
Slimība
Karcinoma
Sinonīmi
HeLa Kyoto H2B-EGFP, HeLa Kyoto H2B EGFP, HeLa-H2B-GFP

Dokumenti

HK EGFP-H2B

Cell line · Preces numurs 300673

The HK EGFP-H2B cell line is a genetically modified Hela Kyoto cell line used primarily for the study of chromatin dynamics and nuclear processes. This ce...

€800.00bez nodokļa un piegādes izmaksām
Neliels krājums
Lot
Ieteicams (jaunākā partija)
1

01Vispārīga informācija

Apraksts

HK EGFP-H2B šūnu līnija ir ģenētiski modificēta Hela Kyoto šūnu līnija, ko galvenokārt izmanto hromatīna dinamikas un kodola procesu pētījumiem. Šī šūnu līnija ekspresē saplūšanas proteīnu, kas sastāv no pastiprināta zaļā fluorescējošā proteīna (EGFP) un histona H2B. EGFP integrācija H2B proteīnā ļauj reāllaika hromatīna vizualizāciju dzīvās šūnās fluorescences mikroskopijā, sniedzot vērtīgu ieskatu par kodola telpisko un laika organizāciju.

EGFP-H2B saplūšana atvieglo daudzus lietojumus šūnu bioloģijā, tostarp šūnu cikla norises, mitozes un gēnu ekspresijas regulēšanas pētījumus. Novērojot fluorescences modeļus, pētnieki var identificēt un analizēt šūnu cikla fāzes, hromosomu segregāciju un strukturālās izmaiņas kodolā. Šī šūnu līnija ir iegūta no pieauguša cilvēka šūnām, tādējādi nodrošinot tās atbilstību cilvēka bioloģijai, un to izmanto gan fundamentālajos bioloģiskajos pētījumos, gan lietišķos farmācijas pētījumos.

Turklāt HK EGFP-H2B šūnu līnija kalpo kā svarīgs instruments epigenētikas pētījumos. Iespēja tieši novērot histonu uzvedību palīdz izprast epigenētiskos mehānismus, kas ir gēnu ekspresijas un klusēšanas pamatā, kā arī dažādu epigenētisko modifikatoru ietekmi. Šūnu līnijas plašā pielietošana dzīvu šūnu attēlveidošanas eksperimentos padara to neaizstājamu detalizētos pētījumos, kuros nepieciešama dinamiska šūnu analīze.

Audums
Dzemdes kakls
Slimība
Karcinoma
Sinonīmi
  • HeLa Kyoto H2B-EGFP
  • HeLa Kyoto H2B EGFP
  • HeLa-H2B-GFP

02Klasifikācija

Organisms
Cilvēks
Sekss
Sieviete
Augšanas īpašības
Atbalstītājs
ĢMO statuss
GMO-S1
Sīkāka informācija par ĢMO statusu
GMO-S1: This HeLa Kyoto line contains an EGFP-H2B construct allowing real-time visualization of chromatin organization. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Bioloģiskās drošības līmenis
1

03Raksturlielumi

Morfoloģija
Epitēlijveidīgas šūnas ar mozaīkveida akmens formu

04Identifikatori

Atsauce
HK EGFP-H2B (Cytion kataloga numurs 300673)
NCBI nodokļu identifikācijas numurs
9606
Cellosaurus
CVCL_1D63
noguldītājs
Ellenberga laboratorija (EMBL)

05Pazīmes un uzņēmība

Proteīnu ekspresija
EGFP-H2B: Atrašanās vieta/gēns: 1..589 / Pcmv, 613..1329 / EGFP, 1387..1764 / H2B, 3001..3795 / KanR/NeoR
Produkti
CMV Promotors, Histons H2B, Neomicīns, Fosfotransferāze

06Apstrāde un audzēšana

Barotne
DMEM, w: 4,5 g/l glikozes, w: 4 mM L-glutamīna, w: 3,7 g/l NaHCO3, w: 1,0 mM nātrija piruvāta (Cytion izstrādājuma numurs 820300a)
Inkubācijas vide

37°C, 5%CO2, mitrināta atmosfēra.

Papildinājumi
Papildināt barotni ar 10% FBS
Disociācijas reaģents
Accutase
Pārstādīšana
Noņemt veco barotni no pielipušajām šūnām un mazgāt tās ar PBS, kurā nav kalcija un magnija. T25 kolbām izmantojiet 3-5 ml PBS, bet T75 kolbām - 5-10 ml. Pēc tam pilnībā pārklājiet šūnas ar Accutase, izmantojot 1-2 ml T25 kolbām un 2,5 ml T75 kolbām. Ļaujiet šūnām inkubēties istabas temperatūrā 8-10 minūtes, lai tās atdalītos. Pēc inkubācijas uzmanīgi samaisiet šūnas ar 10 ml barotnes, lai tās atkārtoti suspendētu, pēc tam centrifugējiet 3 minūtes ar 300xg. Izmetiet supernatantu, atkārtoti suspendējiet šūnas svaigā barotnē un pārvietojiet tās jaunās kolbās, kurās jau ir svaiga barotne.
Sēšanas blīvums
1 x 104 šūnas/cm2
Šķidruma atjaunošana
2 līdz 3 reizes nedēļā
Atgūšanās pēc atkusņa
Pēc atkausēšanas izkliedējiet šūnas uz šķīvja ar blīvumu 5 x 104 šūnas/cm2 un ļaujiet šūnām atgūties no sasaldēšanas procesa un pielipt vismaz 24 stundas.
Atkausēšana un kultivēšana
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kvalitātes kontrole un kriokonservācija

Sterilitāte

Mikoplazmas piesārņojums tiek izslēgts, izmantojot gan uz PCR balstītus testus, gan uz luminiscenci balstītas mikoplazmas noteikšanas metodes.

Lai pārliecinātos, ka nav baktēriju, sēnīšu vai rauga piesārņojuma, šūnu kultūras katru dienu vizuāli pārbauda.

Saldēšanas barotne
Kā kriokonservēšanas barotni mēs izmantojam pilnvērtīgu augšanas barotni (ieskaitot FBS) + 10 % DMSO, lai nodrošinātu pietiekamu dzīvotspēju pēc atkausēšanas, vai CM-1 (Cytion kataloga numurs 800100), kas ietver optimizētus osmoprotektorus un metaboliskos stabilizatorus, lai uzlabotu atveseļošanos un samazinātu krioinducēto stresu.
Uzglabāšanas nosacījumi

Ilgstošai uzglabāšanai flakonus ievietojiet šķidrā slāpeklī ar tvaika fāzi aptuveni -150 līdz -196 °C temperatūrā. Uzglabāšana -80 °C temperatūrā ir pieļaujama tikai kā īss starpposms pirms pārvietošanas uz šķidro slāpekli.

Piegādes nosacījumi

Kriokonservētas šūnu līnijas tiek sūtītas uz sausā ledus apstiprinātā, izolētā iepakojumā ar pietiekamu dzesēšanas šķidruma daudzumu, lai visā transportēšanas laikā uzturētu aptuveni -78 °C temperatūru. Pēc saņemšanas nekavējoties pārbaudiet iepakojumu un nekavējoties pārvietojiet flakonus uz atbilstošu uzglabāšanas vietu.

08Ziedotājs

Donora vecums
30 gadi
Etniskā piederība
Afroamerikānis