HK EGFP-alfa-tubulīns/H2B-mCherry

HK EGFP-alfa-tubulīna/H2B-mCherry HeLa Kyoto šūnu līnija ir rūpīgi izstrādāts modelis, kas paredzēts detalizētai šūnu procesu vizualizācijai. Šī klonālā līnija ir stabili transficēta, lai ekspresētu divas fluorescējošu proteīnu fūzijas, kas ļauj reāllaikā attēlot gan hromatīnu, gan mikrotubulāro tīklu. Sarkanais fluorescējošais proteīns mCherry ir sapludināts ar galveno histona proteīnu H2B, veidojot H2B-mCherry. Šis saplūšanas proteīns tiek ekspresēts no pH2B-mCherry-IRES-neo3 plazmīdas un kalpo kā hromatīna marķieris, izceļot kodola DNS dzīvās šūnas attēlā un atvieglojot hromatīna dinamikas un kodola arhitektūras pētījumus.

Turklāt šī šūnu līnija ekspresē monomēru pastiprinātu GFP (zaļo fluorescējošo proteīnu), kas sapludināts ar α-tubulīnu un ieviests ar pmEGFP-α-tubulīns-IRES-puro2b plazmīdu. GFP-α-tubulīna saplūšana nodrošina spilgti zaļu fluorescenci, kas iezīmē mikrotubulu struktūras šūnā. Šī īpašība ir ļoti svarīga, lai pētītu mikrotubulu organizāciju, dinamiku un to lomu šūnu dalīšanās un iekššūnu transportā. Šo konstrukciju stabila integrācija ļauj nepārtraukti un ilgstoši novērot šos šūnu komponentus bez atkārtotas transfekcijas, tādējādi samazinot mainīgumu un uzlabojot eksperimentu rezultātu ticamību. Zāļu rezistences atlase pēc transfekcijas nodrošina šīs līnijas šūnu ekspresijas stabilitāti un vienveidību.

37°C, 5%_CO2, mitrināta atmosfēra.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

Mikoplazmas piesārņojums tiek izslēgts, izmantojot gan uz PCR balstītus testus, gan uz luminiscenci balstītas mikoplazmas noteikšanas metodes.

Lai pārliecinātos, ka nav baktēriju, sēnīšu vai rauga piesārņojuma, šūnu kultūras katru dienu vizuāli pārbauda.

Ilgstošai uzglabāšanai flakonus ievietojiet šķidrā slāpeklī ar tvaika fāzi aptuveni -150 līdz -196 °C temperatūrā. Uzglabāšana -80 °C temperatūrā ir pieļaujama tikai kā īss starpposms pirms pārvietošanas uz šķidro slāpekli.

Kriokonservētas šūnu līnijas tiek sūtītas uz sausā ledus apstiprinātā, izolētā iepakojumā ar pietiekamu dzesēšanas šķidruma daudzumu, lai visā transportēšanas laikā uzturētu aptuveni -78 °C temperatūru. Pēc saņemšanas nekavējoties pārbaudiet iepakojumu un nekavējoties pārvietojiet flakonus uz atbilstošu uzglabāšanas vietu.

Uzņēmumā Cytion mēs atbalstām savu produktu kvalitāti un dzīvotspēju. Mēs garantējam, ka mūsu šūnas būs dzīvotspējīgas kultivēšanas sākumā 60 dienas pēc nosūtīšanas no mūsu ražotnēm. Mēs nodrošinām, ka visi materiāli atbilst analīzes sertifikātā un/vai produkta lapā aprakstītajām specifikācijām

Lai iegūtu sīkāku informāciju, lūdzu, skatiet mūsu <a href=""/"/Kas mēs esam/garantija/"" hreflang=""x-default"">Garantijas paziņojumu