HK EGFP-alfa-tubulin/H2B-mCherry

A HK EGFP-alfa-tubulin/H2B-mCherry HeLa Kyoto sejtvonal egy aprólékosan megtervezett modell, amelyet a sejtfolyamatok részletes vizualizálására terveztek. Ezt a klonális vonalat stabilan transzfektálták, hogy két fluoreszcens fehérje fúziót expresszáljon, amelyek lehetővé teszik mind a kromatin, mind a mikrotubuláris hálózat valós idejű képalkotását. Az mCherry vörös fluoreszcens fehérjét a H2B központi hisztonfehérjéhez fuzionálták, létrehozva a H2B-mCherry-t. Ez a fúziós fehérje a pH2B-mCherry-IRES-neo3 plazmidból expresszálódik, és kromatin markerként szolgál, kiemelve a nukleáris DNS-t élősejtes képalkotásban, és megkönnyítve a kromatin dinamikájának és a nukleáris architektúrának a vizsgálatát.

Ezenkívül ez a sejtvonal α-tubulinhoz fuzionált monomerikus, fokozott GFP-t (zöld fluoreszcens fehérje) expresszál, amelyet a pmEGFP-α-tubulin-IRES-puro2b plazmidon keresztül juttatunk be. A GFP-α-tubulin fúzió élénk zöld fluoreszcenciát biztosít, amely kirajzolja a sejtben lévő mikrotubulus struktúrákat. Ez a tulajdonság kulcsfontosságú a mikrotubulusok szerveződésének, dinamikájának, valamint a sejtosztódásban és a sejten belüli transzportban betöltött szerepüknek a tanulmányozásához. E konstrukciók stabil integrációja lehetővé teszi e sejtkomponensek folyamatos, hosszú távú megfigyelését ismételt transzfekció nélkül, így csökkentve a variabilitást és növelve a kísérleti eredmények megbízhatóságát. A transzfekciót követő gyógyszerrezisztencia-szelekció biztosítja a stabilitást és az expresszió egységességét a sejtek között ebben a vonalban.

37°C, 5%_CO2, párásított légkör.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A mikoplazma-szennyeződést mind a PCR-alapú vizsgálatokkal, mind a lumineszcencia-alapú mikoplazma-kimutatási módszerekkel kizárják.

A bakteriális, gombás vagy élesztőgombás szennyeződés elkerülése érdekében a sejtkultúrákat napi vizuális ellenőrzésnek vetik alá.

Hosszú távú tartósítás céljából helyezze az üvegeket gőzfázisú folyékony nitrogénbe, körülbelül -150 és -196 °C közötti hőmérsékleten. A -80 °C-on történő tárolás csak rövid átmeneti lépésként fogadható el a folyékony nitrogénbe való átvitel előtt.

A kriokonzervált sejtvonalakat szárazjégen, validált, szigetelt csomagolásban szállítják, elegendő hűtőközeggel, hogy a szállítás során a hőmérsékletet körülbelül -78 °C-on tartsák. Átvételkor azonnal vizsgálja meg a tárolóedényt, és haladéktalanul helyezze át az injekciós üvegeket a megfelelő tárolóhelyre.

A Cytionnál kiállunk termékeink minősége és életképessége mellett. Garantáljuk, hogy sejtjeink a tenyésztés megkezdésekor életképesek lesznek, a létesítményünkből történő kiszállítás után 60 napig. Biztosítjuk, hogy minden anyag megfelel az analitikai tanúsítványban és/vagy a terméklapon leírt specifikációknak

A teljes részleteket lásd <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang="""x-default"">Garancia nyilatkozatunkban