HK EGFP-alpha-tubulin/H2B-mCherry

สายพันธุ์เซลล์ HK EGFP-alpha-tubulin/H2B-mCherry HeLa Kyoto เป็นแบบจำลองที่ออกแบบอย่างพิถีพิถันเพื่อใช้ในการสังเกตกระบวนการของเซลล์อย่างละเอียด สายพันธุ์โคลนนี้ได้รับการถ่ายยีนอย่างคงที่เพื่อแสดงโปรตีนเรืองแสงสองชนิดที่เชื่อมต่อกัน ซึ่งช่วยให้สามารถถ่ายภาพโครมาตินและเครือข่ายไมโครทูบูลได้แบบเรียลไทม์โปรตีนเรืองแสงสีแดง mCherry ถูกเชื่อมต่อกับโปรตีนฮิสโตนหลัก H2B สร้างโปรตีนผสม H2B-mCherry โปรตีนผสมนี้ถูกแสดงออกจากพลาสมิด pH2B-mCherry-IRES-neo3 และทำหน้าที่เป็นเครื่องหมายโครมาติน โดยเน้นยีนดีเอ็นเอในนิวเคลียสในการถ่ายภาพเซลล์มีชีวิต และช่วยในการศึกษาพลวัตของโครมาตินและโครงสร้างนิวเคลียส

นอกจากนี้ สายเซลล์นี้ยังแสดงโปรตีน GFP (โปรตีนเรืองแสงสีเขียว) ที่ถูกเพิ่มประสิทธิภาพในรูปโมโนเมอร์ ซึ่งถูกเชื่อมต่อกับ α-tubulin โดยใช้พลาสมิด pmEGFP-α-tubulin-IRES-puro2b การเชื่อมต่อระหว่าง GFP กับ α-tubulin นี้ทำให้เกิดการเรืองแสงสีเขียวสดใสที่มองเห็นโครงสร้างไมโครทูบูลภายในเซลล์ได้อย่างชัดเจนคุณลักษณะนี้มีความสำคัญอย่างยิ่งสำหรับการศึกษาการจัดระเบียบพลวัตของไมโครทูบูล และบทบาทของพวกมันในกระบวนการแบ่งเซลล์และการขนส่งภายในเซลล์ การรวมตัวที่เสถียรของโครงสร้างเหล่านี้ช่วยให้สามารถสังเกตองค์ประกอบของเซลล์เหล่านี้ได้อย่างต่อเนื่องในระยะยาวโดยไม่จำเป็นต้องทำการทรานส์เฟกชันซ้ำ ซึ่งช่วยลดความแปรปรวนและเพิ่มความน่าเชื่อถือของผลการทดลอง การคัดเลือกความต้านทานต่อยาหลังการทรานส์เฟกชันช่วยให้มั่นใจในความเสถียรและความสม่ำเสมอของการแสดงออกในเซลล์ทั้งหมดในสายพันธุ์นี้

37°C, 5%_CO2, บรรยากาศชื้น

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

การปนเปื้อนของไมโคพลาสมาถูกตัดออกโดยใช้ทั้งการทดสอบแบบ PCR และการตรวจหาไมโคพลาสมาโดยใช้วิธีการเรืองแสง

เพื่อให้แน่ใจว่าไม่มีการปนเปื้อนของแบคทีเรีย เชื้อรา หรือยีสต์ การเพาะเลี้ยงเซลล์จะถูกตรวจสอบด้วยสายตาทุกวัน

สำหรับการเก็บรักษาในระยะยาว ให้วางหลอดบรรจุในไนโตรเจนเหลวในสถานะไอที่อุณหภูมิประมาณ −150 ถึง −196 °C การเก็บรักษาที่อุณหภูมิ −80 °C สามารถใช้ได้เฉพาะในระยะสั้นก่อนการย้ายไปยังไนโตรเจนเหลวเท่านั้น

เซลล์ไลน์ที่แช่แข็งในไนโตรเจนเหลวจะถูกจัดส่งในบรรจุภัณฑ์ที่ผ่านการตรวจสอบแล้วและมีการเก็บรักษาความเย็นด้วยน้ำแข็งแห้ง พร้อมสารทำความเย็นที่เพียงพอเพื่อรักษาอุณหภูมิประมาณ −78 °C ตลอดการขนส่ง เมื่อได้รับสินค้า ให้ตรวจสอบภาชนะทันทีและถ่ายโอนหลอดทดลองไปยังที่เก็บที่เหมาะสมโดยไม่ล่าช้า

ที่Cytion เรามุ่งมั่นในคุณภาพและความมีชีวิตของผลิตภัณฑ์ของเรา เรารับประกันว่าเซลล์ของเราจะยังมีชีวิตอยู่เมื่อเริ่มการเพาะเลี้ยงเป็นเวลา 60 วันหลังจากจัดส่งจากโรงงานของเรา เรารับรองว่าวัสดุทั้งหมดเป็นไปตามข้อกำหนดที่ระบุไว้ใน ใบรับรองการวิเคราะห์ และ/หรือแผ่นข้อมูลผลิตภัณฑ์

สำหรับรายละเอียดเพิ่มเติม กรุณาดูที่ <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">นโยบายการรับประกัน.