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HK Mad2-LAP/H2B-mCherry
Gewebe
Gebärmutterhals
Krankheit
Karzinom
Synonyme
HeLa Kyoto Mad2-LAP and H2B-mCherry, HeLa Kyoto Mad2-LAP

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HK Mad2-LAP/H2B-mCherry

Cell line · Artikelnummer 300920

The HK Mad2-LAP/H2B-mCherry cell line is a genetically engineered cell model extensively utilized for studying chromosome segregation and the spindle asse...

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01Allgemeine Informationen

Beschreibung

Die HK Mad2-LAP/H2B-mCherry-Zelllinie ist ein gentechnisch hergestelltes Zellmodell, das in großem Umfang zur Untersuchung der Chromosomentrennung und des Kontrollpunkts der Spindelmontage während der Mitose eingesetzt wird. Diese Zellen stammen von HeLa-Kyoto-Zellen ab, einer robusten menschlichen Zelllinie, die ursprünglich aus einem Gebärmutterhalskarzinom gewonnen wurde. Der HK Mad2-LAP-Aspekt (LAP-tagged Mad2) der Zelllinie erleichtert die Visualisierung und Funktionsanalyse des Mad2-Proteins, einer kritischen Komponente des Spindelassemblierungs-Kontrollpunkts, der den Beginn der Anaphase verhindert, bis alle Chromosomen an der Metaphasenplatte richtig ausgerichtet sind.

Der Einbau von H2B-mCherry, bei dem das Histon H2B mit dem fluoreszierenden Protein mCherry markiert ist, ermöglicht die Echtzeitdarstellung der Chromatindynamik während der Zellteilung. Diese Eigenschaft macht die HK Mad2-LAP/H2B-mCherry-Zelllinie zu einem hervorragenden Werkzeug für hochauflösende Live-Cell-Imaging-Techniken zur Beobachtung der Chromosomenbewegungen und des mitotischen Fortschritts in menschlichen Zellen unter verschiedenen Versuchsbedingungen. Die Verwendung von Fluoreszenzmarkern ermöglicht eine präzise Verfolgung und Quantifizierung und bietet so wertvolle Einblicke in die molekularen Mechanismen der Zellzyklusregulierung und der Chromosomenstabilität.

Gewebe
Gebärmutterhals
Krankheit
Karzinom
Synonyme
  • HeLa Kyoto Mad2-LAP and H2B-mCherry
  • HeLa Kyoto Mad2-LAP

02Klassifizierung

Organismus
Mensch
Sex
Weiblich
Wachstumseigenschaften
Anhänger
GVO-Status
GMO-S1
Angaben zum GVO-Status
GMO-S1: This HeLa Kyoto line contains Mad2-LAP and H2B-mCherry constructs enabling visualization of spindle checkpoint dynamics. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Biologische Sicherheitsstufe
1

03Merkmale

Morphologie
Epithelähnliche Zellen mit mosaikartiger Steinform

04Bezeichner

Quellenangabe
HK Mad2-LAP/H2B-mCherry (Cytion-Katalognummer 300920)
NCBI-Steuer-ID
9606
Cellosaurus
CVCL_1D65
Einleger
Das Ellenberg-Labor (EMBL)

05Expression und Anfälligkeit

Proteinexpression
Mad2-LAP/H2B-mCherry

06Handhabung und Kultur

Nährmedium
DMEM, w: 4,5 g/L Glucose, w: 4 mM L-Glutamin, w: 3,7 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM Natriumpyruvat (Cytion-Artikelnummer 820300a)
Inkubationsatmosphäre

37°C, 5%CO2, befeuchtete Atmosphäre.

Nahrungsergänzungsmittel
Ergänzen Sie das Medium mit 10% FBS
Dissoziationsreagenz
Accutase
Subkultivierung
Entfernen Sie das alte Medium von den adhärenten Zellen und waschen Sie sie mit PBS, das kein Kalzium und Magnesium enthält. Für T25-Kolben 3-5 ml PBS und für T75-Kolben 5-10 ml verwenden. Anschließend werden die Zellen vollständig mit Accutase bedeckt, wobei 1-2 ml für T25-Kolben und 2,5 ml für T75-Kolben verwendet werden. Lassen Sie die Zellen 8-10 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren, um sie abzulösen. Nach der Inkubation mischen Sie die Zellen vorsichtig mit 10 ml Medium, um sie zu resuspendieren, und zentrifugieren sie dann 3 Minuten lang bei 300xg. Den Überstand verwerfen, die Zellen in frischem Medium resuspendieren und in neue Kolben überführen, die bereits frisches Medium enthalten.
Aussaatdichte
1 x 104 Zellen/cm²
Flüssigkeitswechsel
2 bis 3 Mal pro Woche
Erholung nach dem Auftauen
Nach dem Auftauen die Zellen mit einer Dichte von 5 x 104 Zellen/cm² ausplattieren und die Zellen mindestens 24 Stunden lang vom Gefrierprozess erholen und adhärieren lassen.
Auftauen und Kultivierung
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Qualitätskontrolle und Kryokonservierung

Sterilität

Eine Kontamination mit Mykoplasmen wird sowohl durch PCR-basierte Assays als auch durch lumineszenzbasierte Mykoplasmen-Nachweisverfahren ausgeschlossen.

Um sicherzustellen, dass keine Kontamination mit Bakterien, Pilzen oder Hefen vorliegt, werden die Zellkulturen täglich visuell überprüft.

Gefriermedium
Als Kryokonservierungsmedium verwenden wir komplettes Wachstumsmedium (einschließlich FBS) + 10 % DMSO für eine angemessene Lebensfähigkeit nach dem Auftauen oder CM-1 (Cytion Katalognummer 800100), das optimierte Osmoprotektoren und Stoffwechselstabilisatoren enthält, um die Erholung zu verbessern und kryoinduzierten Stress zu reduzieren.
Lagerbedingungen

Zur Langzeitkonservierung werden die Fläschchen in flüssigem Stickstoff bei etwa -150 bis -196 °C gelagert. Eine Lagerung bei -80 °C ist nur als kurzer Zwischenschritt vor der Überführung in flüssigen Stickstoff akzeptabel.

Versandbedingungen

Kryokonservierte Zelllinien werden auf Trockeneis in einer validierten, isolierten Verpackung mit ausreichend Kühlmittel versandt, um während des gesamten Transports eine Temperatur von etwa -78 °C aufrechtzuerhalten. Prüfen Sie den Behälter bei Erhalt sofort und bringen Sie die Fläschchen unverzüglich in ein geeignetes Lager.

08Spender

Alter des Spenders
30 Jahre
Ethnische Zugehörigkeit
Afroamerikaner