İçeriğe atla
HK Mad2-LAP/H2B-mCherry
Doku
Serviks
Hastalık
Karsinom
Eş anlamlılar
HeLa Kyoto Mad2-LAP and H2B-mCherry, HeLa Kyoto Mad2-LAP

HK Mad2-LAP/H2B-mCherry

Cell line · Ürün numarası 300920

The HK Mad2-LAP/H2B-mCherry cell line is a genetically engineered cell model extensively utilized for studying chromosome segregation and the spindle asse...

€800.00vergi ve kargo hariç
Stokta mevcut
Lot
Önerilen (en taze parti)
  • CoA
1

01Genel bilgiler

Açıklama

HK Mad2-LAP/H2B-mCherry hücre hattı, mitoz sırasında kromozom ayrımı ve iğ düzeneği kontrol noktasını incelemek için yaygın olarak kullanılan genetik olarak tasarlanmış bir hücre modelidir. Bu hücreler, aslen servikal karsinomdan alınan sağlam bir insan hücre hattı olan HeLa Kyoto hücrelerinden türetilmiştir. Hücre hattının HK Mad2-LAP (LAP etiketli Mad2) özelliği, tüm kromozomlar metafaz plakasında düzgün bir şekilde hizalanana kadar anafaz başlangıcını önleyen iğ düzeneği kontrol noktasının kritik bir bileşeni olan Mad2 proteininin görselleştirilmesini ve işlevsel analizini kolaylaştırır.

Histon H2B'nin mCherry floresan proteini ile etiketlendiği H2B-mCherry'nin dahil edilmesi, hücre bölünmesi sırasında kromatin dinamiklerinin gerçek zamanlı olarak görüntülenmesini sağlar. Bu özellik, HK Mad2-LAP/H2B-mCherry hücre hattını, çeşitli deneysel koşullar altında insan hücrelerinde kromozomal hareketleri ve mitotik ilerlemeyi gözlemlemek için yüksek çözünürlüklü canlı hücre görüntüleme teknikleri için mükemmel bir araç haline getirmektedir. Floresan etiketlerin kullanımı hassas izleme ve kantifikasyona yardımcı olarak hücre döngüsü düzenlemesi ve kromozomal stabiliteyi yöneten moleküler mekanizmalar hakkında değerli bilgiler sağlar.

Doku
Serviks
Hastalık
Karsinom
Eş anlamlılar
  • HeLa Kyoto Mad2-LAP and H2B-mCherry
  • HeLa Kyoto Mad2-LAP

02Sınıflandırma

Canlı
İnsan
Cinsiyet
Kadın
Büyüme özellikleri
Bağlı
GDO durumu
GMO-S1
GDO durumuna ilişkin ayrıntılar
GMO-S1: This HeLa Kyoto line contains Mad2-LAP and H2B-mCherry constructs enabling visualization of spindle checkpoint dynamics. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Biyogüvenlik seviyesi
1

03Özellikler

Morfoloji
Mozaik taş şekilli epitel benzeri hücreler

04Tanımlayıcılar

Kaynak gösterimi
HK Mad2-LAP/H2B-mCherry (Cytion katalog numarası 300920)
NCBI Vergi Kimlik Numarası
9606
Cellosaurus
CVCL_1D65
Mevduat sahibi
Ellenberg Laboratuvarı (EMBL)

05İfade ve duyarlılık

Protein ekspresyonu
Mad2-LAP/H2B-mCherry

06İşleme ve yetiştirme

Besiyeri
DMEM, w: 4,5 g/L Glukoz, w: 4 mM L-Glutamin, w: 3,7 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM Sodyum piruvat (Cytion ürün numarası 820300a)
Kuluçka ortamı

37°C, %5CO2, nemlendirilmiş atmosfer.

Takviyeler
Ortamı %10 FBS ile takviye edin
Ayrıştırma reaktifi
Accutase
Alt kültür oluşturma
Yapışık hücrelerden eski ortamı çıkarın ve kalsiyum ve magnezyum içermeyen PBS ile yıkayın. T25 şişeleri için 3-5 ml PBS ve T75 şişeleri için 5-10 ml kullanın. Ardından, T25 flasklar için 1-2 ml ve T75 flasklar için 2,5 ml kullanarak hücreleri Accutase ile tamamen kaplayın. Hücreleri ayırmak için oda sıcaklığında 8-10 dakika inkübasyona bırakın. İnkübasyondan sonra, hücreleri yeniden süspanse etmek için 10 ml besiyeriyle hafifçe karıştırın, ardından 300xg'de 3 dakika santrifüjleyin. Süpernatantı atın, hücreleri taze besiyerinde yeniden süspanse edin ve zaten taze besiyeri içeren yeni şişelere aktarın.
Ekim yoğunluğu
1 x 104 hücre/cm2
Sıvı değişimi
haftada 2 ila 3 kez
Çözülme sonrası toparlanma
Çözüldükten sonra, hücreleri 5 x 104 hücre/cm2 olarak plakaya yerleştirin ve hücrelerin dondurma işleminden kurtulmasını ve en az 24 saat boyunca yapışmasını bekleyin.
Çözme ve kültürleme
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kalite kontrol ve kriyoprezervasyon

Kısırlık

Mikoplazma kontaminasyonu hem PCR tabanlı tahliller hem de lüminesans tabanlı mikoplazma tespit yöntemleri kullanılarak dışlanır.

Bakteriyel, fungal veya maya kontaminasyonu olmadığından emin olmak için hücre kültürleri günlük görsel incelemelere tabi tutulur.

Dondurma ortamı
Kriyoprezervasyon ortamı olarak, yeterli çözülme sonrası canlılık için tam büyüme ortamı (FBS dahil) + %10 DMSO veya iyileşmeyi artırmak ve kriyo-indüklenmiş stresi azaltmak için optimize edilmiş ozmoprotektanlar ve metabolik stabilizatörler içeren CM-1 (Cytion katalog numarası 800100) kullanıyoruz.
Saklama koşulları

Uzun süreli muhafaza için flakonları yaklaşık -150 ila -196 °C'de buhar fazlı sıvı nitrojen içine yerleştirin. 80 °C'de saklama yalnızca sıvı nitrojene aktarılmadan önce kısa bir ara adım olarak kabul edilebilir.

Nakliye koşulları

Kriyoprezerve edilmiş hücre hatları, nakliye boyunca yaklaşık -78 °C'yi korumak için yeterli soğutucu akışkan içeren, onaylanmış, yalıtılmış ambalajlarda kuru buz üzerinde gönderilir. Teslim aldığınızda, kabı hemen inceleyin ve flakonları gecikmeden uygun depoya aktarın.

08Bağışçı

Bağışçının yaşı
30 yıl
Etnik köken
Afro-Amerikan