Pereiti prie turinio
HK Mad2-LAP/H2B-mCherry
Audinys
Gimdos kaklelis
Liga
Karcinoma
Sinonimai
HeLa Kyoto Mad2-LAP and H2B-mCherry, HeLa Kyoto Mad2-LAP

Dokumentai

HK Mad2-LAP/H2B-mCherry

Cell line · Prekės numeris 300920

The HK Mad2-LAP/H2B-mCherry cell line is a genetically engineered cell model extensively utilized for studying chromosome segregation and the spindle asse...

€800.00neįskaitant mokesčių ir pristatymo išlaidų

Pritaikymas / Rekomendacijos

Yra sandėlyje
Lot
Rekomenduojama (šviežiausia partija)
  • CoA
1

01Bendra informacija

Aprašymas

HK Mad2-LAP/H2B-mCherry ląstelių linija yra genetiškai modifikuotas ląstelių modelis, plačiai naudojamas tiriant chromosomų segregaciją ir verpstės surinkimo kontrolinį tašką mitozės metu. Šios ląstelės yra kilusios iš HeLa Kyoto ląstelių, tvirtų žmogaus ląstelių linijos, iš pradžių paimtos iš gimdos kaklelio karcinomos. Ląstelių linijos HK Mad2-LAP (su LAP žymėtu Mad2) aspektas palengvina Mad2 baltymo, svarbiausio verpstės surinkimo kontrolės punkto komponento, neleidžiančio prasidėti anafazei, kol visos chromosomos nėra tinkamai išlygintos metafazės plokštelėje, vizualizaciją ir funkcinę analizę.

H2B-mCherry, kai histonas H2B žymimas mCherry fluorescenciniu baltymu, inkorporavimas leidžia realiuoju laiku vaizduoti chromatino dinamiką ląstelės dalijimosi metu. Dėl šios savybės HK Mad2-LAP/H2B-mCherry ląstelių linija yra puikus įrankis didelės skiriamosios gebos tiesioginio ląstelių vaizdavimo metodams, skirtiems stebėti chromosomų judėjimą ir mitozės eigą žmogaus ląstelėse įvairiomis eksperimentinėmis sąlygomis. Naudojant fluorescencines žymes galima tiksliai sekti ir kiekybiškai įvertinti, taip gaunant vertingų įžvalgų apie molekulinius mechanizmus, reguliuojančius ląstelių ciklo reguliavimą ir chromosomų stabilumą.

Audinys
Gimdos kaklelis
Liga
Karcinoma
Sinonimai
  • HeLa Kyoto Mad2-LAP and H2B-mCherry
  • HeLa Kyoto Mad2-LAP

02Klasifikacija

Organizmas
Žmogus
Seksas
Moteris
Augimo savybės
Prisijungęs
GMO statusas
GMO-S1
Išsami informacija apie GMO statusą
GMO-S1: This HeLa Kyoto line contains Mad2-LAP and H2B-mCherry constructs enabling visualization of spindle checkpoint dynamics. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Biologinio saugumo lygis
1

03Charakteristikos

Morfologija
Į epitelį panašios ląstelės su mozaikos formos akmenukais

04Identifikatoriai

Nuoroda
HK Mad2-LAP/H2B-mCherry (Cytion katalogo numeris 300920)
NCBI mokesčių identifikavimo kodas
9606
Cellosaurus
CVCL_1D65
Indėlininkas
Ellenbergo laboratorija (EMBL)

05Išraiška ir jautrumas

Baltojų baltymų ekspresija
Mad2-LAP/H2B-mCherry

06Laikymas ir auginimas

Maitinamoji terpė
DMEM, š: 4,5 g/l gliukozės, š: 4 mM L-glutamino, š: 3,7 g/l NaHCO3, š: 1,0 mM natrio piruvato (Cytion gaminio numeris 820300a)
Inkubacijos aplinka

37 °C, 5 %CO2, drėkintoje atmosferoje.

Maisto papildai
Papildykite terpę 10 % FBS
Disociacijos reagentas
Accutase
Subkultūrinis auginimas
Pašalinkite seną terpę nuo prilipusių ląstelių ir nuplaukite jas PBS, kuriame nėra kalcio ir magnio. T25 kolboms naudokite 3-5 ml PBS, o T75 kolboms - 5-10 ml. Tuomet visiškai užpilkite ląsteles "Accutase", naudodami 1-2 ml T25 kolboms ir 2,5 ml T75 kolboms. Leiskite ląstelėms inkubuotis kambario temperatūroje 8-10 minučių, kad jos atsiskirtų. Po inkubacijos atsargiai sumaišykite ląsteles su 10 ml terpės, kad jos vėl suspenduotų, tada 3 minutes centrifuguokite 300xg greičiu. Išmeskite supernatantą, vėl sutirpinkite ląsteles šviežioje terpėje ir perkelkite jas į naujas kolbas, kuriose jau yra šviežia terpė.
Sėjos tankis
1 x 104 ląstelės/cm2
Skysčių atnaujinimas
2-3 kartus per savaitę
Atkūrimas po atšilimo
Atšildžius, išdėliokite ląsteles 5 x 104 ląstelių/cm2 tankumu ir leiskite ląstelėms atsigauti po užšaldymo proceso ir prisitvirtinti bent 24 valandas.
Atšildymas ir auginimas
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kokybės kontrolė ir kriokonservavimas

Sterilumas

Mikoplazmos užterštumas atmetamas taikant PGR pagrįstus tyrimus ir liuminescencinius mikoplazmos aptikimo metodus.

Siekiant užtikrinti, kad nebūtų užteršimo bakterijomis, grybeliais ar mielėmis, ląstelių kultūros kasdien vizualiai tikrinamos.

Šaldymo terpė
Kaip kriokonservavimo terpę naudojame visišką augimo terpę (įskaitant FBS) + 10 % DMSO, kad būtų užtikrintas tinkamas gyvybingumas po atšildymo, arba CM-1 (Cytion katalogo numeris 800100), kurioje yra optimizuotų osmoprotektorių ir medžiagų apykaitos stabilizatorių, kad būtų pagerintas atsigavimas ir sumažintas kriokonservavimo sukeltas stresas.
Laikymo sąlygos

Norėdami ilgai saugoti, įdėkite buteliukus į garų fazės skystą azotą maždaug -150-196 °C temperatūroje. Laikymas -80 °C temperatūroje yra priimtinas tik kaip trumpas tarpinis etapas prieš perkeliant į skystąjį azotą.

Pristatymo sąlygos

Kriokonservuotos ląstelių linijos gabenamos ant sauso ledo patvirtintoje, izoliuotoje pakuotėje su pakankamu kiekiu šaldymo skysčio, kad pervežimo metu būtų palaikoma maždaug -78 °C temperatūra. Gavę pakuotę, nedelsdami ją apžiūrėkite ir nedelsdami perkelkite mėgintuvėlius į tinkamą saugyklą.

08Donoras

Donoro amžius
30 metų
Etninė priklausomybė
Afroamerikietis