Skip to content
HK Mad2-LAP/H2B-mCherry
Tissue
צוואר הרחם
Disease
קרצינומה
Synonyms
HeLa Kyoto Mad2-LAP and H2B-mCherry, HeLa Kyoto Mad2-LAP

Documents

HK Mad2-LAP/H2B-mCherry

Cell line · Product number 300920

The HK Mad2-LAP/H2B-mCherry cell line is a genetically engineered cell model extensively utilized for studying chromosome segregation and the spindle asse...

US$800.00excl. tax and shipping
In stock
Lot
Recommended (freshest lot)
  • CoA
1

01General information

Description

קו התאים HK Mad2-LAP/H2B-mCherry הוא מודל תאים מהונדס גנטית המשמש רבות לחקר הפרדת כרומוזומים ונקודת הבקרה של הרכבת הציר במהלך המיטוזה. תאים אלה נגזרים מתאי HeLa Kyoto, קו תאים אנושיים עמיד שמקורו בסרטן צוואר הרחם. המאפיין HK Mad2-LAP (LAP-tagged Mad2) של קו התאים מקל על ההדמיה והניתוח התפקודי של חלבון Mad2, מרכיב קריטי בנקודת הבקרה של הרכבת הציר המונע את תחילת האנפזה עד שכל הכרומוזומים מסודרים כראוי בצלחת המטאפזה.

שילוב של H2B-mCherry, שבו היסטון H2B מתויג בחלבון פלואורסצנטי mCherry, מאפשר הדמיה בזמן אמת של הדינמיקה של הכרומטין במהלך חלוקת התאים. תכונה זו הופכת את קו התאים HK Mad2-LAP/H2B-mCherry לכלי מצוין לטכניקות הדמיה של תאים חיים ברזולוציה גבוהה, לצורך תצפית על תנועות כרומוזומליות והתקדמות מיטוזה בתאים אנושיים בתנאים ניסויים שונים. השימוש בתגים פלואורסצנטיים מסייע במעקב ובכימות מדויקים, ובכך מספק תובנות חשובות על המנגנונים המולקולריים השולטים בוויסות מחזור התא וביציבות הכרומוזומים.

Tissue
צוואר הרחם
Disease
קרצינומה
Synonyms
  • HeLa Kyoto Mad2-LAP and H2B-mCherry
  • HeLa Kyoto Mad2-LAP

02Classification

Organism
Human
Sex
Female
Growth properties
Adherent
GMO status
GMO-S1
GMO status details
GMO-S1: This HeLa Kyoto line contains Mad2-LAP and H2B-mCherry constructs enabling visualization of spindle checkpoint dynamics. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Biosafety level
1

03Characteristics

Morphology
תאים דמויי אפיתל בצורת אבן פסיפס

04Identifiers

Citation
HK Mad2-LAP/H2B-mCherry (מספר קטלוגי Cytion 300920)
NCBI TaxID
9606
Cellosaurus
CVCL_1D65
Depositor
מעבדת אלנברג (EMBL)

05Expression and susceptibility

Protein expression
Mad2-LAP/H2B-mCherry

06Handling and culture

Culture medium
DMEM, w: 4.5 g/L גלוקוז, w: 4 mM L-גלוטמין, w: 3.7 g/L NaHCO3, w: 1.0 mM נתרן פירובט (מספר קטלוגי Cytion 820300a)
Incubation atmosphere

37°C, 5%CO2, אווירה לחה.

Supplements
הוסף לתווך 10% FBS
Dissociation reagent
אקוטאז
Subculturing
הסר את המדיום הישן מהתאים הדבוקים ושטוף אותם ב-PBS ללא סידן ומגנזיום. עבור בקבוקי T25, השתמש ב-3-5 מ"ל PBS, ועבור בקבוקי T75, השתמש ב-5-10 מ"ל. לאחר מכן, כסה את התאים לחלוטין ב-Accutase, תוך שימוש ב-1-2 מ"ל עבור בקבוקי T25 ו-2.5 מ"ל עבור בקבוקי T75. השאר את התאים לדגירה בטמפרטורת החדר למשך 8-10 דקות כדי לנתק אותם. לאחר הדגירה, ערבב בעדינות את התאים עם 10 מ"ל של מדיום כדי להחזיר אותם לתמיסה, ואז סובב בצנטריפוגה ב-300xg למשך 3 דקות. השלך את הנוזל העליון, החזר את התאים לתמיסה במדיום טרי והעבר אותם לצלחות חדשות שכבר מכילות מדיום טרי.
Seeding density
1 x 104 תאים/סמ"ר
Fluid renewal
2 עד 3 פעמים בשבוע
Post-thaw recovery
לאחר ההפשרה, צלחת את התאים ב-5 x 104 תאים/סמ"ר והניח לתאים להתאושש מתהליך ההקפאה ולהידבק למשך 24 שעות לפחות.
Thawing and culturing
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Quality control and cryopreservation

Sterility

זיהום במיקופלסמה נשלל באמצעות בדיקות מבוססות PCR ושיטות זיהוי מיקופלסמה מבוססות לומניסצנציה.

כדי להבטיח שאין זיהום חיידקי, פטרייתי או שמרי, תרבויות התאים עוברות בדיקות ויזואליות יומיות.

Freeze medium
כמדיום לשימור בקירור, אנו משתמשים במדיום גידול מלא (כולל FBS) + 10% DMSO כדי להבטיח חיוניות נאותה לאחר ההפשרה, או CM-1 (מספר קטלוגי Cytion 800100), הכולל חומרים אוסמו-מגנים ומייצבי מטבוליזם משופרים כדי לשפר את ההתאוששות ולהפחית את הלחץ הנגרם מהקפאה.
Storage conditions

לשימור לטווח ארוך, יש להניח את הבקבוקונים בחנקן נוזלי במצב של אדי בטמפרטורה של כ-150 עד 196 מעלות צלזיוס. אחסון בטמפרטורה של 80 מעלות צלזיוס מקובל רק כצעד ביניים קצר לפני העברה לחנקן נוזלי.

Shipping conditions

שורות תאים שהוקפאו נשלחות בקרח יבש באריזה מאושרת ומבודדת עם כמות מספקת של חומר קירור כדי לשמור על טמפרטורה של כ-78°C- במהלך ההובלה. עם קבלת המשלוח, יש לבדוק את המכל מיד ולהעביר את הבקבוקונים ללא דיחוי לאחסון מתאים.

08Donor

Donor age
30 שנה
Ethnicity
אפרו-אמריקאי