
- Tissue
- צוואר הרחם
- Disease
- קרצינומה
- Synonyms
- HeLa Kyoto EGFP Kleisin-b, HeLa Kyoto Kleisin-beta EGFP
Documents
HK EGFP-Kleisin-beta
Cell line · Product number 300674
The HK EGFP-Kleisin-beta cell line represents a genetically modified variant of Hela Kyoto cells designed primarily for the study of chromosome cohesion d...
Recommended (freshest lot)
01General information
- Description
קו התאים HK EGFP-Kleisin-beta מייצג גרסה מהונדסת גנטית של תאי Hela Kyoto, שפותחה בעיקר לצורך מחקר על לכידות כרומוזומים במהלך מחזור התא. קו תאים זה מבטא חלבון פלואורסצנטי ירוק משופר (EGFP) הממוזג עם חלבון Kleisin-beta, מרכיב חיוני במכלול הקוהסין, החיוני ללכידות כרומוזומים אחים. הביטוי של Kleisin-beta המסומן ב-EGFP מאפשר הדמיה בזמן אמת של הדינמיקה והלוקליזציה של הקוהסין לאורך מחזור התא, מה שמאפשר ניתוח מפורט של מבנה הכרומוזומים ותפקודם בהקשר התאי.
מודל תאים זה משמש בדרך כלל במחקרים המתמקדים במנגנונים של הפרדת כרומוזומים מיטוטיים ומיוטיים, ובמיוחד בבחינת האופן שבו ויסות הקוהזיה משפיע על היציבות הגנטית ועל חלוקת התאים. התיוג הזוהר של Kleisin-beta מאפשר לחקור את האינטראקציה שלו עם רכיבי קוהסין אחרים וחלבוני כרומוזומים, ומספק תובנות לגבי ההרכבה המרחבית והזמנית של קוהסין על כרומוזומים. השימוש בקו תאים זה משתרע על מחקרים של הפרעות גנטיות וסרטן שבהם תפקוד הקוהסין מופרע, ומספק כלי חשוב להבנת הפתוגנזה ולפיתוח אסטרטגיות טיפוליות.
- Tissue
- צוואר הרחם
- Disease
- קרצינומה
- Synonyms
- HeLa Kyoto EGFP Kleisin-b
- HeLa Kyoto Kleisin-beta EGFP
02Classification
- Organism
- Human
- Sex
- Female
- Growth properties
- Adherent
- GMO status
- GMO-S1
- GMO status details
- GMO-S1: This HeLa Kyoto line contains an EGFP-kleisin-beta construct for live-cell studies of cohesin and chromosome architecture. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
- Biosafety level
- 1
03Characteristics
- Morphology
- תאים דמויי אפיתל בצורת אבן פסיפס
04Identifiers
- Citation
- HK EGFP-Kleisin-beta (מספר קטלוגי Cytion 300674)
- NCBI TaxID
- 9606
- Cellosaurus
- CVCL_1D64
- Depositor
- מעבדת אלנברג (EMBL)
05Expression and susceptibility
- Protein expression
- EGFP-Kleisin-β: מיקום/גן: 1..589 / Pcmv, 619..645 / Flag-tag, 661..1368 / GFP, 1393..3206 / Kleisin Beta, 4474..5268 KanR/NeoR
06Handling and culture
- Culture medium
- DMEM, w: 4.5 g/L גלוקוז, w: 4 mM L-גלוטמין, w: 3.7 g/L NaHCO3, w: 1.0 mM נתרן פירובט (מספר קטלוגי Cytion 820300a)
- Incubation atmosphere
37°C, 5%CO2, אווירה לחה.
- Supplements
- הוסף לתווך 10% FBS
- Dissociation reagent
- אקוטאז
- Subculturing
- הסר את המדיום הישן מהתאים הדבוקים ושטוף אותם ב-PBS ללא סידן ומגנזיום. עבור בקבוקי T25, השתמש ב-3-5 מ"ל PBS, ועבור בקבוקי T75, השתמש ב-5-10 מ"ל. לאחר מכן, כסה את התאים לחלוטין ב-Accutase, תוך שימוש ב-1-2 מ"ל עבור בקבוקי T25 ו-2.5 מ"ל עבור בקבוקי T75. השאר את התאים לדגירה בטמפרטורת החדר למשך 8-10 דקות כדי לנתק אותם. לאחר הדגירה, ערבב בעדינות את התאים עם 10 מ"ל של מדיום כדי להחזיר אותם לתמיסה, ואז סובב בצנטריפוגה ב-300xg למשך 3 דקות. השלך את הנוזל העליון, החזר את התאים לתמיסה במדיום טרי והעבר אותם לצלחות חדשות שכבר מכילות מדיום טרי.
- Seeding density
- 1 x 104 תאים/סמ"ר
- Fluid renewal
- 2 עד 3 פעמים בשבוע
- Post-thaw recovery
- לאחר ההפשרה, צלחת את התאים ב-5 x 104 תאים/סמ"ר והניח לתאים להתאושש מתהליך ההקפאה ולהידבק למשך 24 שעות לפחות.
- Thawing and culturing
Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.
Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.
For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.
Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.
Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.
Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.
Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.
Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.
07Quality control and cryopreservation
- Sterility
זיהום במיקופלסמה נשלל באמצעות בדיקות מבוססות PCR ושיטות זיהוי מיקופלסמה מבוססות לומניסצנציה.
כדי להבטיח שאין זיהום חיידקי, פטרייתי או שמרי, תרבויות התאים עוברות בדיקות ויזואליות יומיות.
- Freeze medium
- כמדיום לשימור בקירור, אנו משתמשים במדיום גידול מלא (כולל FBS) + 10% DMSO כדי להבטיח חיוניות נאותה לאחר ההפשרה, או CM-1 (מספר קטלוגי Cytion 800100), הכולל חומרים אוסמו-מגנים ומייצבי מטבוליזם משופרים כדי לשפר את ההתאוששות ולהפחית את הלחץ הנגרם מהקפאה.
- Storage conditions
לשימור לטווח ארוך, יש להניח את הבקבוקונים בחנקן נוזלי במצב של אדי בטמפרטורה של כ-150 עד 196 מעלות צלזיוס. אחסון בטמפרטורה של 80 מעלות צלזיוס מקובל רק כצעד ביניים קצר לפני העברה לחנקן נוזלי.
- Shipping conditions
שורות תאים שהוקפאו נשלחות בקרח יבש באריזה מאושרת ומבודדת עם כמות מספקת של חומר קירור כדי לשמור על טמפרטורה של כ-78°C- במהלך ההובלה. עם קבלת המשלוח, יש לבדוק את המכל מיד ולהעביר את הבקבוקונים ללא דיחוי לאחסון מתאים.
08Donor
- Donor age
- 30 שנה
- Ethnicity
- אפרו-אמריקאי
09Legal and safety
- Safety precautions
- כאשר מתכננים לאחסן קריוביאל בחנקן נוזלי להפשרה עתידית, חובה להקפיד על אמצעי בטיחות מחמירים. יש להקפיד על שימוש בכפפות ובבגדים מגנים מתאימים, וכן על שימוש במסכת פנים או משקפי מגן בעת העברת דגימות קפואות אל מיכל החנקן הנוזלי או ממנו. זאת כדי להפחית את הסיכון לפציעה כתוצאה מפיצוץ אפשרי של הקריוביאל בעת הוצאתו, העלול לגרום להתזת רסיסים חדים.
- Warranty
ב-Cytion, אנו עומדים מאחורי האיכות והכדאיות של המוצרים שלנו. אנו מבטיחים שתאינו יהיו קיימים בתחילת התרבית למשך 60 יום לאחר המשלוח מהמתקנים שלנו. אנו מבטיחים שכל החומרים תואמים למפרטים המתוארים בתעודת הניתוח ו/או בדף המוצר.
לפרטים מלאים, אנא עיינו ב <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">הצהרת האחריות שלנו
- Third-party agreements apply
- Yes
.jpg)
.jpg)
.jpg)
.jpg)
.jpg)
.jpg)
.jpg)