Skip to content
HK EGFP-Kleisin-beta
Tissue
צוואר הרחם
Disease
קרצינומה
Synonyms
HeLa Kyoto EGFP Kleisin-b, HeLa Kyoto Kleisin-beta EGFP

Documents

HK EGFP-Kleisin-beta

Cell line · Product number 300674

The HK EGFP-Kleisin-beta cell line represents a genetically modified variant of Hela Kyoto cells designed primarily for the study of chromosome cohesion d...

US$800.00excl. tax and shipping
In stock
Lot
Recommended (freshest lot)
1

01General information

Description

קו התאים HK EGFP-Kleisin-beta מייצג גרסה מהונדסת גנטית של תאי Hela Kyoto, שפותחה בעיקר לצורך מחקר על לכידות כרומוזומים במהלך מחזור התא. קו תאים זה מבטא חלבון פלואורסצנטי ירוק משופר (EGFP) הממוזג עם חלבון Kleisin-beta, מרכיב חיוני במכלול הקוהסין, החיוני ללכידות כרומוזומים אחים. הביטוי של Kleisin-beta המסומן ב-EGFP מאפשר הדמיה בזמן אמת של הדינמיקה והלוקליזציה של הקוהסין לאורך מחזור התא, מה שמאפשר ניתוח מפורט של מבנה הכרומוזומים ותפקודם בהקשר התאי.

מודל תאים זה משמש בדרך כלל במחקרים המתמקדים במנגנונים של הפרדת כרומוזומים מיטוטיים ומיוטיים, ובמיוחד בבחינת האופן שבו ויסות הקוהזיה משפיע על היציבות הגנטית ועל חלוקת התאים. התיוג הזוהר של Kleisin-beta מאפשר לחקור את האינטראקציה שלו עם רכיבי קוהסין אחרים וחלבוני כרומוזומים, ומספק תובנות לגבי ההרכבה המרחבית והזמנית של קוהסין על כרומוזומים. השימוש בקו תאים זה משתרע על מחקרים של הפרעות גנטיות וסרטן שבהם תפקוד הקוהסין מופרע, ומספק כלי חשוב להבנת הפתוגנזה ולפיתוח אסטרטגיות טיפוליות.

Tissue
צוואר הרחם
Disease
קרצינומה
Synonyms
  • HeLa Kyoto EGFP Kleisin-b
  • HeLa Kyoto Kleisin-beta EGFP

02Classification

Organism
Human
Sex
Female
Growth properties
Adherent
GMO status
GMO-S1
GMO status details
GMO-S1: This HeLa Kyoto line contains an EGFP-kleisin-beta construct for live-cell studies of cohesin and chromosome architecture. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Biosafety level
1

03Characteristics

Morphology
תאים דמויי אפיתל בצורת אבן פסיפס

04Identifiers

Citation
HK EGFP-Kleisin-beta (מספר קטלוגי Cytion 300674)
NCBI TaxID
9606
Cellosaurus
CVCL_1D64
Depositor
מעבדת אלנברג (EMBL)

05Expression and susceptibility

Protein expression
EGFP-Kleisin-β: מיקום/גן: 1..589 / Pcmv, 619..645 / Flag-tag, 661..1368 / GFP, 1393..3206 / Kleisin Beta, 4474..5268 KanR/NeoR

06Handling and culture

Culture medium
DMEM, w: 4.5 g/L גלוקוז, w: 4 mM L-גלוטמין, w: 3.7 g/L NaHCO3, w: 1.0 mM נתרן פירובט (מספר קטלוגי Cytion 820300a)
Incubation atmosphere

37°C, 5%CO2, אווירה לחה.

Supplements
הוסף לתווך 10% FBS
Dissociation reagent
אקוטאז
Subculturing
הסר את המדיום הישן מהתאים הדבוקים ושטוף אותם ב-PBS ללא סידן ומגנזיום. עבור בקבוקי T25, השתמש ב-3-5 מ"ל PBS, ועבור בקבוקי T75, השתמש ב-5-10 מ"ל. לאחר מכן, כסה את התאים לחלוטין ב-Accutase, תוך שימוש ב-1-2 מ"ל עבור בקבוקי T25 ו-2.5 מ"ל עבור בקבוקי T75. השאר את התאים לדגירה בטמפרטורת החדר למשך 8-10 דקות כדי לנתק אותם. לאחר הדגירה, ערבב בעדינות את התאים עם 10 מ"ל של מדיום כדי להחזיר אותם לתמיסה, ואז סובב בצנטריפוגה ב-300xg למשך 3 דקות. השלך את הנוזל העליון, החזר את התאים לתמיסה במדיום טרי והעבר אותם לצלחות חדשות שכבר מכילות מדיום טרי.
Seeding density
1 x 104 תאים/סמ"ר
Fluid renewal
2 עד 3 פעמים בשבוע
Post-thaw recovery
לאחר ההפשרה, צלחת את התאים ב-5 x 104 תאים/סמ"ר והניח לתאים להתאושש מתהליך ההקפאה ולהידבק למשך 24 שעות לפחות.
Thawing and culturing
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Quality control and cryopreservation

Sterility

זיהום במיקופלסמה נשלל באמצעות בדיקות מבוססות PCR ושיטות זיהוי מיקופלסמה מבוססות לומניסצנציה.

כדי להבטיח שאין זיהום חיידקי, פטרייתי או שמרי, תרבויות התאים עוברות בדיקות ויזואליות יומיות.

Freeze medium
כמדיום לשימור בקירור, אנו משתמשים במדיום גידול מלא (כולל FBS) + 10% DMSO כדי להבטיח חיוניות נאותה לאחר ההפשרה, או CM-1 (מספר קטלוגי Cytion 800100), הכולל חומרים אוסמו-מגנים ומייצבי מטבוליזם משופרים כדי לשפר את ההתאוששות ולהפחית את הלחץ הנגרם מהקפאה.
Storage conditions

לשימור לטווח ארוך, יש להניח את הבקבוקונים בחנקן נוזלי במצב של אדי בטמפרטורה של כ-150 עד 196 מעלות צלזיוס. אחסון בטמפרטורה של 80 מעלות צלזיוס מקובל רק כצעד ביניים קצר לפני העברה לחנקן נוזלי.

Shipping conditions

שורות תאים שהוקפאו נשלחות בקרח יבש באריזה מאושרת ומבודדת עם כמות מספקת של חומר קירור כדי לשמור על טמפרטורה של כ-78°C- במהלך ההובלה. עם קבלת המשלוח, יש לבדוק את המכל מיד ולהעביר את הבקבוקונים ללא דיחוי לאחסון מתאים.

08Donor

Donor age
30 שנה
Ethnicity
אפרו-אמריקאי