HK EGFP-Kleisin-beta

A linhagem celular HK EGFP-Kleisin-beta representa uma variante geneticamente modificada das células Hela Kyoto, projetada principalmente para o estudo da coesão cromossômica durante o ciclo celular. Essa linhagem celular expressa uma proteína fluorescente verde aprimorada (EGFP) fundida com a proteína Kleisin-beta, um componente crucial do complexo coesina, essencial para a coesão das cromátides irmãs. A expressão da Kleisin-beta marcada com EGFP permite a visualização em tempo real da dinâmica e da localização da coesina ao longo do ciclo celular, facilitando análises detalhadas da estrutura e função cromossômica no contexto celular.

Esse modelo celular é normalmente utilizado em pesquisas focadas nos mecanismos de segregação cromossômica mitótica e meiótica, analisando particularmente como a regulação da coesina influencia a estabilidade genética e a divisão celular. A marcação fluorescente da Kleisin-beta permite investigar sua interação com outros componentes da coesina e proteínas cromossômicas, fornecendo insights sobre a montagem espacial e temporal da coesina nos cromossomos. O uso dessa linhagem celular se estende a estudos de doenças genéticas e cânceres nos quais a função da coesina é prejudicada, oferecendo uma ferramenta valiosa para a compreensão da patogênese e o desenvolvimento de estratégias terapêuticas.

37 °C, 5% de CO₂, atmosfera umidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é descartada por meio de ensaios baseados em PCR e de métodos de detecção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não haja contaminação por bactérias, fungos ou leveduras, as culturas celulares são submetidas a inspeções visuais diárias.

Para preservação a longo prazo, coloque os frascos em nitrogênio líquido em fase de vapor a uma temperatura entre aproximadamente −150 e −196 °C. O armazenamento a −80 °C é aceitável apenas como uma etapa intermediária de curta duração antes da transferência para o nitrogênio líquido.

As linhagens celulares criopreservadas são enviadas em gelo seco, em embalagens isoladas e validadas, com refrigerante suficiente para manter a temperatura em aproximadamente −78 °C durante todo o transporte. Ao receber a remessa, inspecione o recipiente imediatamente e transfira os frascos sem demora para o local de armazenamento adequado.

Na Cytion, garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células permanecerão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou na Ficha Técnica do Produto.

Para obter todos os detalhes, consulte nossa Declaração de Garantia.