İçeriğe atla
HK EGFP-Kleisin-beta
Doku
Serviks
Hastalık
Karsinom
Eş anlamlılar
HeLa Kyoto EGFP Kleisin-b, HeLa Kyoto Kleisin-beta EGFP

HK EGFP-Kleisin-beta

Cell line · Ürün numarası 300674

The HK EGFP-Kleisin-beta cell line represents a genetically modified variant of Hela Kyoto cells designed primarily for the study of chromosome cohesion d...

€800.00vergi ve kargo hariç
Stokta mevcut
Lot
Önerilen (en taze parti)
1

01Genel bilgiler

Açıklama

HK EGFP-Kleisin-beta hücre hattı, öncelikle hücre döngüsü sırasında kromozom kohezyonunun incelenmesi için tasarlanmış Hela Kyoto hücrelerinin genetik olarak değiştirilmiş bir varyantını temsil eder. Bu hücre hattı, kardeş kromatid kohezyonu için hayati önem taşıyan kohezin kompleksinin önemli bir bileşeni olan Kleisin-beta proteini ile kaynaşmış gelişmiş bir yeşil floresan proteini (EGFP) ifade eder. EGFP etiketli Kleisin-beta'nın ifadesi, hücre döngüsü boyunca kohezin dinamiklerinin ve lokalizasyonunun gerçek zamanlı olarak görselleştirilmesine olanak tanıyarak hücresel bağlamda kromozom yapısı ve işlevinin ayrıntılı analizlerini kolaylaştırır.

Bu hücre modeli tipik olarak mitotik ve mayotik kromozom ayrımı mekanizmalarına odaklanan araştırmalarda, özellikle de kohezin regülasyonunun genetik stabiliteyi ve hücre bölünmesini nasıl etkilediğine bakarken kullanılır. Kleisin-beta'nın floresan etiketlemesi, diğer kohezin bileşenleri ve kromozomal proteinlerle etkileşiminin araştırılmasına olanak tanıyarak, kohezinin kromozomlar üzerindeki uzamsal ve zamansal montajına ilişkin içgörüler sağlar. Bu hücre hattının kullanımı, kohezin fonksiyonunun bozulduğu genetik bozukluklar ve kanser çalışmalarına kadar uzanmakta, patogenezi anlamak ve terapötik stratejiler geliştirmek için değerli bir araç sunmaktadır.

Doku
Serviks
Hastalık
Karsinom
Eş anlamlılar
  • HeLa Kyoto EGFP Kleisin-b
  • HeLa Kyoto Kleisin-beta EGFP

02Sınıflandırma

Canlı
İnsan
Cinsiyet
Kadın
Büyüme özellikleri
Bağlı
GDO durumu
GMO-S1
GDO durumuna ilişkin ayrıntılar
GMO-S1: This HeLa Kyoto line contains an EGFP-kleisin-beta construct for live-cell studies of cohesin and chromosome architecture. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Biyogüvenlik seviyesi
1

03Özellikler

Morfoloji
Mozaik taş şekilli epitel benzeri hücreler

04Tanımlayıcılar

Kaynak gösterimi
HK EGFP-Kleisin-beta (Cytion katalog numarası 300674)
NCBI Vergi Kimlik Numarası
9606
Cellosaurus
CVCL_1D64
Mevduat sahibi
Ellenberg Laboratuvarı (EMBL)

05İfade ve duyarlılık

Protein ekspresyonu
EGFP-Kleisin-β: Konum/Gen: 1..589 / Pcmv, 619..645 / Flag-tag, 661..1368 / GFP, 1393..3206 / Kleisin Beta, 4474..5268 KanR/NeoR

06İşleme ve yetiştirme

Besiyeri
DMEM, w: 4,5 g/L Glukoz, w: 4 mM L-Glutamin, w: 3,7 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM Sodyum piruvat (Cytion ürün numarası 820300a)
Kuluçka ortamı

37°C, %5CO2, nemlendirilmiş atmosfer.

Takviyeler
Ortamı %10 FBS ile takviye edin
Ayrıştırma reaktifi
Accutase
Alt kültür oluşturma
Yapışık hücrelerden eski ortamı çıkarın ve kalsiyum ve magnezyum içermeyen PBS ile yıkayın. T25 şişeleri için 3-5 ml PBS ve T75 şişeleri için 5-10 ml kullanın. Ardından, T25 flasklar için 1-2 ml ve T75 flasklar için 2,5 ml kullanarak hücreleri Accutase ile tamamen kaplayın. Hücreleri ayırmak için oda sıcaklığında 8-10 dakika inkübasyona bırakın. İnkübasyondan sonra, hücreleri yeniden süspanse etmek için 10 ml besiyeriyle hafifçe karıştırın, ardından 300xg'de 3 dakika santrifüjleyin. Süpernatantı atın, hücreleri taze besiyerinde yeniden süspanse edin ve zaten taze besiyeri içeren yeni şişelere aktarın.
Ekim yoğunluğu
1 x 104 hücre/cm2
Sıvı değişimi
haftada 2 ila 3 kez
Çözülme sonrası toparlanma
Çözüldükten sonra, hücreleri 5 x 104 hücre/cm2 olarak plakaya yerleştirin ve hücrelerin dondurma işleminden kurtulmasını ve en az 24 saat boyunca yapışmasını bekleyin.
Çözme ve kültürleme
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kalite kontrol ve kriyoprezervasyon

Kısırlık

Mikoplazma kontaminasyonu hem PCR tabanlı tahliller hem de lüminesans tabanlı mikoplazma tespit yöntemleri kullanılarak dışlanır.

Bakteriyel, fungal veya maya kontaminasyonu olmadığından emin olmak için hücre kültürleri günlük görsel incelemelere tabi tutulur.

Dondurma ortamı
Kriyoprezervasyon ortamı olarak, yeterli çözülme sonrası canlılık için tam büyüme ortamı (FBS dahil) + %10 DMSO veya iyileşmeyi artırmak ve kriyo-indüklenmiş stresi azaltmak için optimize edilmiş ozmoprotektanlar ve metabolik stabilizatörler içeren CM-1 (Cytion katalog numarası 800100) kullanıyoruz.
Saklama koşulları

Uzun süreli muhafaza için flakonları yaklaşık -150 ila -196 °C'de buhar fazlı sıvı nitrojen içine yerleştirin. 80 °C'de saklama yalnızca sıvı nitrojene aktarılmadan önce kısa bir ara adım olarak kabul edilebilir.

Nakliye koşulları

Kriyoprezerve edilmiş hücre hatları, nakliye boyunca yaklaşık -78 °C'yi korumak için yeterli soğutucu akışkan içeren, onaylanmış, yalıtılmış ambalajlarda kuru buz üzerinde gönderilir. Teslim aldığınızda, kabı hemen inceleyin ve flakonları gecikmeden uygun depoya aktarın.

08Bağışçı

Bağışçının yaşı
30 yıl
Etnik köken
Afro-Amerikan