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HK EGFP-Kleisin-beta
ティッシュ
子宮頸部
病気
癌腫
同義語
HeLa Kyoto EGFP Kleisin-b, HeLa Kyoto Kleisin-beta EGFP

HK EGFP-Kleisin-beta

Cell line · 製品番号 300674

The HK EGFP-Kleisin-beta cell line represents a genetically modified variant of Hela Kyoto cells designed primarily for the study of chromosome cohesion d...

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01概要

説明

HK EGFP-Kleisin-β細胞株は、主に細胞周期中の染色体の凝集を研究するために設計された、Hela京都細胞の遺伝子改変変種である。この細胞株は、姉妹染色分体の凝集に不可欠なコヒーシン複合体の重要な構成要素であるKleisin-βタンパク質と融合した増強型緑色蛍光タンパク質(EGFP)を発現している。EGFPタグのついたKleisin-βを発現させることで、細胞周期を通してコヒーシンの動態と局在をリアルタイムで可視化することができ、細胞内での染色体の構造と機能の詳細な解析が容易になる。

この細胞モデルは、有糸分裂と減数分裂の染色体分離のメカニズム、特にコヒーシンの制御が遺伝的安定性と細胞分裂にどのように影響するかを研究する際に利用される。Kleisin-βの蛍光タグは、他のコヒーシン構成要素や染色体タンパク質との相互作用を調べることを可能にし、染色体上のコヒーシンの空間的・時間的集合に関する洞察を提供する。この細胞株の利用は、コヒーシン機能が破壊された遺伝性疾患や癌の研究にも広がり、病態の理解や治療戦略の開発に役立つ貴重なツールとなる。

ティッシュ
子宮頸部
病気
癌腫
同義語
  • HeLa Kyoto EGFP Kleisin-b
  • HeLa Kyoto Kleisin-beta EGFP

02分類

生物
人間
セックス
女性
成長特性
アドヘレント
GMOの有無
GMO-S1
GMOのステータスに関する詳細
GMO-S1: This HeLa Kyoto line contains an EGFP-kleisin-beta construct for live-cell studies of cohesin and chromosome architecture. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
バイオセーフティレベル
1

03特徴

形態学
モザイク状の石の形をした上皮様細胞

04識別子

引用
HK EGFP-クライシン-β(Cytionカタログ番号300674)
NCBI 納税者番号
9606
セロサウルス
CVCL_1D64
預金者
エレンバーグ・ラボ(EMBL)

05発現と感受性

タンパク質の発現
EGFP-クライシン-β:位置/遺伝子:1...589/Pcmv、619...645/フラグタグ、661...1368/GFP、1393...3206/クライシンβ、4474...5268 KanR/NeoR

06取り扱いと飼育

培地
DMEM、w:4.5g/Lグルコース、w:4mM L-グルタミン、w:3.7g/L NaHCO3、w:1.0mMピルビン酸ナトリウム(Cytion品番820300a)
培養雰囲気

37℃、5%CO2、加湿雰囲気。

サプリメント
培地に10% FBSを加える
解離試薬
アキュターゼ
継代培養
接着した細胞から古いメデュームを取り除き、カルシウムとマグネシウ ムを除いたPBSで洗浄する。T25フラスコでは3-5ml、T75フラスコでは5-10mlのPBSを使用する。次に、T25フラスコでは1-2ml、T75フラスコでは2.5mlのアキュターゼで細胞を完全に覆う。室温で8-10分間インキュベートし、細胞を剥離させる。インキュベーション後、細胞を10mlの培地と静かに混合して再懸濁し、300xgで3分間遠心する。上清を捨て、細胞を新しいメデュームに懸濁し、新しいメデュームの入った新しいフラスコに移す。
播種密度
1 × 10⁴ 細胞/cm²
流体の更新
週2~3回
解凍後の回復
解凍後、細胞を5×10⁴細胞/cm²で播種し、凍結処理からの回復と接着を少なくとも24時間以上行う。
解凍と培養
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07品質管理と凍結保存

無菌性

マイコプラズマ汚染は、PCRベースのアッセイと発光ベースのマイコプラズマ検出法の両方を用いて除外される。

細菌、真菌、酵母のコンタミネーションがないことを確認するため、細胞培養物は毎日目視検査が行われる。

凍結培地
凍結保存培地としては、融解後の生存率を十分に高めるために完全増殖培地(FBSを含む)+10%DMSO、または回復を促進し凍結によるストレスを軽減するために最適化された浸透保護剤と代謝安定剤を含むCM-1(Cytionカタログ番号800100)を使用している。
保管条件

長期保存の場合、バイアルを-150~-196℃の気相液体窒素に入れる。80℃での保存は、液体窒素に移す前の短い暫定措置としてのみ許容される。

配送条件

凍結保存された細胞株は、輸送中約-78℃を維持するのに十分な保冷剤とともに、有効な断熱包装でドライアイスとともに輸送される。受領後、直ちに容器を検査し、遅滞なくバイアルを適切な保管場所に移してください。

08寄付者

ドナーの年齢
30年
民族
アフリカ系アメリカ人