Gå direkt till innehållet
HK Mad2-LAP/H2B-mCherry
Vävnad
Cervix
Sjukdom
Carcinom
Synonymer
HeLa Kyoto Mad2-LAP and H2B-mCherry, HeLa Kyoto Mad2-LAP

HK Mad2-LAP/H2B-mCherry

Cell line · Produktnummer 300920

The HK Mad2-LAP/H2B-mCherry cell line is a genetically engineered cell model extensively utilized for studying chromosome segregation and the spindle asse...

€800.00exkl. moms och frakt

Anpassning / Rekommendationer

Finns i lager
Lot
Rekommenderat (det färskaste partiet)
  • CoA
1

01Allmän information

Beskrivning

HK Mad2-LAP/H2B-mCherry-cellinjen är en genetiskt modifierad cellmodell som används flitigt för att studera kromosomsegregering och kontrollpunkten för spindelmontering under mitos. Dessa celler härrör från HeLa Kyoto-celler, en robust mänsklig cellinje som ursprungligen togs från ett livmoderhalscancer. Cellinjens HK Mad2-LAP-aspekt (LAP-tagged Mad2) underlättar visualiseringen och den funktionella analysen av Mad2-proteinet, en kritisk komponent i spindelmonterings-kontrollpunkten som förhindrar anafasstart tills alla kromosomer är korrekt inriktade på metafasplattan.

Inkorporering av H2B-mCherry, där histon H2B är märkt med det fluorescerande proteinet mCherry, möjliggör realtidsavbildning av kromatinets dynamik under celldelningen. Denna egenskap gör HK Mad2-LAP/H2B-mCherry-cellinjen till ett utmärkt verktyg för högupplösta tekniker för avbildning av levande celler för att observera kromosomrörelser och mitotisk progression i mänskliga celler under olika experimentella förhållanden. Användningen av fluorescerande taggar underlättar exakt spårning och kvantifiering och ger därmed värdefulla insikter i de molekylära mekanismer som styr cellcykelreglering och kromosomstabilitet.

Vävnad
Cervix
Sjukdom
Carcinom
Synonymer
  • HeLa Kyoto Mad2-LAP and H2B-mCherry
  • HeLa Kyoto Mad2-LAP

02Klassificering

Organism
Människa
Kön
Kvinna
Tillväxtegenskaper
Följsam
GMO-status
GMO-S1
Detaljer om GMO-status
GMO-S1: This HeLa Kyoto line contains Mad2-LAP and H2B-mCherry constructs enabling visualization of spindle checkpoint dynamics. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Biosäkerhetsnivå
1

03Egenskaper

Morfologi
Epitelliknande celler med mosaikstensform

04Identifierare

Källa
HK Mad2-LAP/H2B-mCherry (Cytion katalognummer 300920)
NCBI-skattenummer
9606
Cellosaurus
CVCL_1D65
Insättare
Ellenberg-laboratoriet (EMBL)

05Uttryck och mottaglighet

Proteinexpression
Mad2-LAP/H2B-mCherry

06Hantering och odling

Odlingsmedium
DMEM, w: 4,5 g/L glukos, w: 4 mM L-glutamin, w: 3,7 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM natriumpyruvat (Cytion artikelnummer 820300a)
Inkubationsatmosfär

37°C, 5%CO2, befuktad atmosfär.

Kosttillskott
Komplettera mediet med 10% FBS
Dissociationsmedel
Accutase
Vidareodling
Ta bort det gamla mediet från de adherenta cellerna och tvätta dem med PBS som saknar kalcium och magnesium. Använd 3-5 ml PBS för T25-kolvar och 5-10 ml för T75-kolvar. Täck sedan cellerna helt med Accutase, använd 1-2 ml för T25-kolvar och 2,5 ml för T75-kolvar. Låt cellerna inkubera i rumstemperatur i 8-10 minuter så att de lossnar. Efter inkubationen, blanda cellerna försiktigt med 10 ml medium för att resuspendera dem och centrifugera sedan vid 300xg i 3 minuter. Kassera supernatanten, resuspendera cellerna i färskt medium och överför dem till nya kolvar som redan innehåller färskt medium.
Såtäthet
1 x 104 celler/cm2
Vätskeförnyelse
2 till 3 gånger per vecka
Återhämtning efter upptining
Efter upptining, plattlägg cellerna med 5 x 104 celler/cm2 och låt cellerna återhämta sig från frysprocessen och fästa i minst 24 timmar.
Upptining och odling
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kvalitetskontroll och kryokonservering

Sterilitet

Mykoplasmakontaminering utesluts med hjälp av både PCR-baserade analyser och luminiscensbaserade metoder för mykoplasmadiagnostik.

För att säkerställa att det inte finns någon kontaminering av bakterier, svamp eller jäst utsätts cellkulturerna för dagliga visuella inspektioner.

Frysmedel
Som kryokonserveringsmedium använder vi komplett tillväxtmedium (inklusive FBS) + 10% DMSO för adekvat viabilitet efter upptining, eller CM-1 (Cytion katalognummer 800100), som innehåller optimerade osmoprotektanter och metaboliska stabilisatorer för att förbättra återhämtningen och minska kryoinducerad stress.
Förvaringsförhållanden

För långtidsförvaring, placera flaskorna i flytande kväve i ångfas vid ca -150 till -196 °C. Förvaring vid -80 °C är acceptabelt endast som ett kort mellanliggande steg innan överföring till flytande kväve.

Leveransvillkor

Kryopreserverade cellinjer skickas på torris i validerade, isolerade förpackningar med tillräckligt med kylmedel för att hålla cirka -78 °C under hela transporten. Vid mottagandet ska behållaren omedelbart inspekteras och flaskorna utan dröjsmål överföras till lämplig förvaring.

08Donator

Donatorns ålder
30 år
Etnicitet
Afroamerikan