Ga naar de inhoud
HK Mad2-LAP/H2B-mCherry
Weefsel
Baarmoederhals
Ziekte
Carcinoom
Synoniemen
HeLa Kyoto Mad2-LAP and H2B-mCherry, HeLa Kyoto Mad2-LAP

Documenten

HK Mad2-LAP/H2B-mCherry

Cell line · Productnummer 300920

The HK Mad2-LAP/H2B-mCherry cell line is a genetically engineered cell model extensively utilized for studying chromosome segregation and the spindle asse...

€800.00excl. btw en verzendkosten

Maatwerk / Aanbevelingen

Op voorraad
Lot
Aanbevolen (verste partij)
  • CoA
1

01Algemene informatie

Beschrijving

De HK Mad2-LAP/H2B-mCherry cellijn is een genetisch gemanipuleerd celmodel dat uitgebreid gebruikt wordt voor het bestuderen van chromosoomsegregatie en het controlepunt van de spindelassemblage tijdens mitose. Deze cellen zijn afgeleid van HeLa Kyoto-cellen, een robuuste menselijke cellijn oorspronkelijk afkomstig van een baarmoederhalskanker. Het HK Mad2-LAP (LAP-tagged Mad2) aspect van de cellijn vergemakkelijkt de visualisatie en functionele analyse van het Mad2 eiwit, een kritisch onderdeel van het spindel assemblage controlepunt dat het begin van de anafase voorkomt totdat alle chromosomen goed uitgelijnd zijn op de metafase plaat.

De integratie van H2B-mCherry, waarbij histon H2B is gelabeld met het mCherry fluorescentie-eiwit, zorgt voor real-time beeldvorming van de dynamiek van chromatine tijdens de celdeling. Deze eigenschap maakt de HK Mad2-LAP/H2B-mCherry cellijn een uitstekend hulpmiddel voor hoge-resolutie live-cell imaging technieken om chromosomale bewegingen en mitotische progressie te observeren in menselijke cellen onder verschillende experimentele omstandigheden. Het gebruik van fluorescerende tags helpt bij het nauwkeurig volgen en kwantificeren, waardoor waardevolle inzichten worden verkregen in de moleculaire mechanismen die de celcyclus reguleren en de chromosomale stabiliteit bepalen.

Weefsel
Baarmoederhals
Ziekte
Carcinoom
Synoniemen
  • HeLa Kyoto Mad2-LAP and H2B-mCherry
  • HeLa Kyoto Mad2-LAP

02Classificatie

Organisme
Mens
Seks
Vrouw
Groei-eigenschappen
Aanhanger
GGO-status
GMO-S1
Details over de GGO-status
GMO-S1: This HeLa Kyoto line contains Mad2-LAP and H2B-mCherry constructs enabling visualization of spindle checkpoint dynamics. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Bioveiligheidsniveau
1

03Kenmerken

Morfologie
Epitheelachtige cellen met mozaïeksteenvorm

04Identificatiegegevens

Bronvermelding
HK Mad2-LAP/H2B-mCherry (Cytion catalogusnummer 300920)
NCBI-belastingnummer
9606
Cellosaurus
CVCL_1D65
Inlegger
Het Ellenberg Lab (EMBL)

05Expressie en vatbaarheid

Eiwit-expressie
Mad2-LAP/H2B-mCherry

06Behandeling en kweek

Kweekmedium
DMEM, w: 4,5 g/L Glucose, w: 4 mM L-Glutamine, w: 3,7 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM Natriumpyruvaat (Cytion artikelnummer 820300a)
Incubatieomgeving

37°C, 5%CO2, bevochtigde atmosfeer.

Supplementen
Vul het medium aan met 10% FBS
Dissociatiereagens
Accutase
Heruitplanten
Verwijder het oude medium van de adherente cellen en was ze met PBS zonder calcium en magnesium. Gebruik voor T25-flesjes 3-5 ml PBS en voor T75-flesjes 5-10 ml. Bedek de cellen vervolgens volledig met Accutase, met 1-2 ml voor T25-flesjes en 2,5 ml voor T75-flesjes. Laat de cellen gedurende 8-10 minuten bij kamertemperatuur incuberen om ze los te maken. Na incubatie de cellen voorzichtig mengen met 10 ml medium om ze te resuspenderen en vervolgens centrifugeren bij 300xg gedurende 3 minuten. Gooi het supernatant weg, resuspendeer de cellen in vers medium en breng ze over in nieuwe kolven die al vers medium bevatten.
Zaaidichtheid
1 x 104 cellen/cm2
Vloeistofverversing
2 tot 3 keer per week
Herstel na ontdooiing
Na ontdooien, de cellen op een plaat aanbrengen met een dichtheid van 5 x 104 cellen/cm2 en de cellen minstens 24 uur laten herstellen van het invriesproces en zich hechten.
Ontdooien en kweken
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kwaliteitscontrole en cryopreservatie

Onvruchtbaarheid

Mycoplasmaverontreiniging wordt uitgesloten met zowel PCR-gebaseerde testen als op luminescentie gebaseerde mycoplasmadetectiemethoden.

Om er zeker van te zijn dat er geen besmetting is met bacteriën, schimmels of gisten, worden de celculturen dagelijks onderworpen aan visuele inspecties.

Kweekmedium invriezen
Als cryoconserveringsmedium gebruiken we volledig groeimedium (inclusief FBS) + 10% DMSO voor voldoende levensvatbaarheid na het ontdooien, of CM-1 (Cytion catalogusnummer 800100), dat geoptimaliseerde osmoprotectanten en metabolische stabilisatoren bevat om het herstel te verbeteren en door cryo geïnduceerde stress te verminderen.
Opslagvoorwaarden

Voor langdurige bewaring plaatst u flesjes in vloeibare stikstof in dampfase bij ongeveer -150 tot -196 °C. Opslag bij -80 °C is alleen aanvaardbaar als korte tussenstap vóór overbrenging naar vloeibare stikstof.

Verzendvoorwaarden

Gecryopreserveerde cellijnen worden verzonden op droog ijs in gevalideerde, geïsoleerde verpakkingen met voldoende koelmiddel om gedurende het transport ongeveer -78 °C te handhaven. Inspecteer de verpakking onmiddellijk na ontvangst en breng de flacons onverwijld over naar de juiste opslagplaats.

08Donateur

Leeftijd van de donor
30 jaar
Etnische afkomst
Afro-Amerikaan