Μετάβαση στο περιεχόμενο
HK Mad2-LAP/H2B-mCherry
Ιστός
Τράχηλος μήτρας
Ασθένεια
Καρκίνωμα
Συνώνυμα
HeLa Kyoto Mad2-LAP and H2B-mCherry, HeLa Kyoto Mad2-LAP

Έγγραφα

HK Mad2-LAP/H2B-mCherry

Cell line · Αριθμός προϊόντος 300920

The HK Mad2-LAP/H2B-mCherry cell line is a genetically engineered cell model extensively utilized for studying chromosome segregation and the spindle asse...

€800.00χωρίς ΦΠΑ και έξοδα αποστολής

Προσαρμογή / Προτάσεις

Σε απόθεμα
Lot
Συνιστάται (η πιο φρέσκια παρτίδα)
  • CoA
1

01Γενικές πληροφορίες

Περιγραφή

Η κυτταρική σειρά HK Mad2-LAP/H2B-mCherry είναι ένα γενετικά τροποποιημένο κυτταρικό μοντέλο που χρησιμοποιείται ευρέως για τη μελέτη του διαχωρισμού των χρωμοσωμάτων και του σημείου ελέγχου συναρμολόγησης της ατράκτου κατά τη μίτωση. Τα κύτταρα αυτά προέρχονται από τα κύτταρα HeLa Kyoto, μια ισχυρή ανθρώπινη κυτταρική σειρά που προέρχεται αρχικά από καρκίνωμα του τραχήλου της μήτρας. Η πτυχή HK Mad2-LAP (LAP-tagged Mad2) της κυτταρικής σειράς διευκολύνει την οπτικοποίηση και τη λειτουργική ανάλυση της πρωτεΐνης Mad2, ενός κρίσιμου συστατικού του σημείου ελέγχου συναρμολόγησης της ατράκτου που εμποδίζει την έναρξη της ανάφασης έως ότου όλα τα χρωμοσώματα ευθυγραμμιστούν σωστά στην πλάκα μετάφασης.

Η ενσωμάτωση της H2B-mCherry, όπου η ιστόνη H2B επισημαίνεται με τη φθορίζουσα πρωτεΐνη mCherry, επιτρέπει την απεικόνιση σε πραγματικό χρόνο της δυναμικής της χρωματίνης κατά τη διάρκεια της κυτταρικής διαίρεσης. Αυτό το χαρακτηριστικό καθιστά την κυτταρική σειρά HK Mad2-LAP/H2B-mCherry ένα εξαιρετικό εργαλείο για τεχνικές απεικόνισης ζωντανών κυττάρων υψηλής ανάλυσης για την παρατήρηση των χρωμοσωμικών κινήσεων και της μιτωτικής εξέλιξης σε ανθρώπινα κύτταρα υπό διάφορες πειραματικές συνθήκες. Η χρήση φθορίζουσων ετικετών βοηθά στην ακριβή παρακολούθηση και ποσοτικοποίηση, παρέχοντας έτσι πολύτιμες πληροφορίες για τους μοριακούς μηχανισμούς που διέπουν τη ρύθμιση του κυτταρικού κύκλου και τη χρωμοσωμική σταθερότητα.

Ιστός
Τράχηλος μήτρας
Ασθένεια
Καρκίνωμα
Συνώνυμα
  • HeLa Kyoto Mad2-LAP and H2B-mCherry
  • HeLa Kyoto Mad2-LAP

02Ταξινόμηση

Οργανισμός
Άνθρωπος
Σεξ
Γυναίκα
Ιδιότητες ανάπτυξης
Πιστός
Κατάσταση όσον αφορά τους ΓΤΟ
GMO-S1
Λεπτομέρειες σχετικά με την κατάσταση των ΓΤΟ
GMO-S1: This HeLa Kyoto line contains Mad2-LAP and H2B-mCherry constructs enabling visualization of spindle checkpoint dynamics. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Επίπεδο βιοασφάλειας
1

03Χαρακτηριστικά

Μορφολογία
Επιθηλιακά κύτταρα με ψηφιδωτό σχήμα πέτρας

04Αναγνωριστικά

Παραπομπή
HK Mad2-LAP/H2B-mCherry (αριθμός καταλόγου Cytion 300920)
Αριθμός φορολογικού μητρώου NCBI
9606
Κελλοσαύρος
CVCL_1D65
Καταθέτης
Εργαστήριο Ellenberg (EMBL)

05Έκφραση και ευαισθησία

Έκφραση πρωτεϊνών
Mad2-LAP/H2B-mCherry

06Χειρισμός και καλλιέργεια

Θρεπτικό μέσο
DMEM, w: 4,5 g/L γλυκόζη, w: 4 mM L-γλουταμίνη, w: 3,7 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM πυρουβικό νάτριο (αριθμός άρθρου Cytion 820300a)
Ατμόσφαιρα επώασης

37°C, 5%CO2, υγροποιημένη ατμόσφαιρα.

Συμπληρώματα
Συμπληρώστε το μέσο με 10% FBS
Αντιδραστήριο αποσύνδεσης
Accutase
Αναπαραγωγή σε υποκαλλιέργεια
Αφαιρέστε το παλιό μέσο από τα προσκολλημένα κύτταρα και πλύντε τα με PBS που δεν περιέχει ασβέστιο και μαγνήσιο. Για φιάλες T25, χρησιμοποιήστε 3-5 ml PBS και για φιάλες T75, χρησιμοποιήστε 5-10 ml. Στη συνέχεια, καλύψτε πλήρως τα κύτταρα με Accutase, χρησιμοποιώντας 1-2 ml για φιάλες T25 και 2,5 ml για φιάλες T75. Αφήστε τα κύτταρα να επωαστούν σε θερμοκρασία δωματίου για 8-10 λεπτά για να αποκολληθούν. Μετά την επώαση, αναμείξτε απαλά τα κύτταρα με 10 ml μέσου για να ανασυσταθούν και, στη συνέχεια, φυγοκεντρίστε στα 300xg για 3 λεπτά. Απορρίψτε το υπερκείμενο υγρό, ανασυστάστε τα κύτταρα σε φρέσκο μέσο και μεταφέρετέ τα σε νέες φιάλες που περιέχουν ήδη φρέσκο μέσο.
Πυκνότητα σποράς
1 x 104 κύτταρα/cm2
Ανανέωση υγρών
2 έως 3 φορές την εβδομάδα
Ανάκαμψη μετά την απόψυξη
Μετά την απόψυξη, τοποθετήστε τα κύτταρα σε πλάκα με πυκνότητα 5 x 104 κύτταρα/cm2 και αφήστε τα κύτταρα να αναρρώσουν από τη διαδικασία κατάψυξης και να προσκολληθούν για τουλάχιστον 24 ώρες.
Απόψυξη και καλλιέργεια
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Έλεγχος ποιότητας και κρυοσυντήρηση

Στειρότητα

Η μόλυνση από μυκόπλασμα αποκλείεται με τη χρήση τόσο των δοκιμασιών που βασίζονται στην PCR όσο και των μεθόδων ανίχνευσης μυκοπλάσματος με βάση τη φωταύγεια.

Για να διασφαλιστεί ότι δεν υπάρχει μόλυνση από βακτήρια, μύκητες ή ζύμες, οι κυτταροκαλλιέργειες υποβάλλονται σε καθημερινές οπτικές επιθεωρήσεις.

Μέσο κατάψυξης
Ως μέσο κρυοσυντήρησης, χρησιμοποιούμε πλήρες μέσο ανάπτυξης (συμπεριλαμβανομένου του FBS) + 10% DMSO για επαρκή βιωσιμότητα μετά την απόψυξη, ή CM-1 (αριθμός καταλόγου Cytion 800100), το οποίο περιλαμβάνει βελτιστοποιημένα ωσμοπροστατευτικά και μεταβολικούς σταθεροποιητές για την ενίσχυση της ανάκαμψης και τη μείωση του στρες που προκαλείται από την κρυοσυντήρηση.
Συνθήκες αποθήκευσης

Για μακροχρόνια συντήρηση, τοποθετήστε τα φιαλίδια σε υγρό άζωτο σε φάση ατμών σε θερμοκρασία περίπου -150 έως -196 °C. Η αποθήκευση στους -80 °C είναι αποδεκτή μόνο ως σύντομο ενδιάμεσο βήμα πριν από τη μεταφορά σε υγρό άζωτο.

Όροι αποστολής

Οι κρυοσυντηρημένες κυτταρικές σειρές αποστέλλονται σε ξηρό πάγο σε επικυρωμένη, μονωμένη συσκευασία με επαρκές ψυκτικό μέσο για τη διατήρηση περίπου των -78 °C καθ' όλη τη διάρκεια της μεταφοράς. Κατά την παραλαβή, επιθεωρήστε αμέσως τον περιέκτη και μεταφέρετε τα φιαλίδια χωρίς καθυστέρηση στην κατάλληλη αποθήκη.

08Δωρητής

Ηλικία δωρητή
30 χρόνια
Εθνικότητα
Αφροαμερικανός