Przejdź do treści
HK Mad2-LAP/H2B-mCherry
Chusteczka
Szyjka macicy
Choroba
Rak
Synonimy
HeLa Kyoto Mad2-LAP and H2B-mCherry, HeLa Kyoto Mad2-LAP

Dokumenty

HK Mad2-LAP/H2B-mCherry

Cell line · Numer produktu 300920

The HK Mad2-LAP/H2B-mCherry cell line is a genetically engineered cell model extensively utilized for studying chromosome segregation and the spindle asse...

€800.00bez podatku i kosztów wysyłki
W magazynie
Lot
Polecane (najświeższa partia)
  • CoA
1

01Informacje ogólne

Opis

Linia komórkowa HK Mad2-LAP/H2B-mCherry jest genetycznie zmodyfikowanym modelem komórkowym szeroko wykorzystywanym do badania segregacji chromosomów i punktu kontrolnego montażu wrzeciona podczas mitozy. Komórki te pochodzą z komórek HeLa Kyoto, silnej ludzkiej linii komórkowej pierwotnie pobranej z raka szyjki macicy. Aspekt linii komórkowej HK Mad2-LAP (Mad2 znakowany LAP) ułatwia wizualizację i analizę funkcjonalną białka Mad2, krytycznego składnika punktu kontrolnego montażu wrzeciona, który zapobiega wystąpieniu anafazy, dopóki wszystkie chromosomy nie zostaną prawidłowo wyrównane na płytce metafazy.

Inkorporacja H2B-mCherry, gdzie histon H2B jest znakowany białkiem fluorescencyjnym mCherry, pozwala na obrazowanie w czasie rzeczywistym dynamiki chromatyny podczas podziału komórki. Ta cecha sprawia, że linia komórkowa HK Mad2-LAP/H2B-mCherry jest doskonałym narzędziem do wysokorozdzielczych technik obrazowania na żywo w celu obserwacji ruchów chromosomów i progresji mitotycznej w ludzkich komórkach w różnych warunkach eksperymentalnych. Zastosowanie znaczników fluorescencyjnych pomaga w precyzyjnym śledzeniu i kwantyfikacji, zapewniając w ten sposób cenny wgląd w mechanizmy molekularne regulujące regulację cyklu komórkowego i stabilność chromosomów.

Chusteczka
Szyjka macicy
Choroba
Rak
Synonimy
  • HeLa Kyoto Mad2-LAP and H2B-mCherry
  • HeLa Kyoto Mad2-LAP

02Klasyfikacja

Organizm
Człowiek
Seks
Kobieta
Właściwości związane ze wzrostem
Zwolennik
Status GMO
GMO-S1
Szczegółowe informacje dotyczące statusu GMO
GMO-S1: This HeLa Kyoto line contains Mad2-LAP and H2B-mCherry constructs enabling visualization of spindle checkpoint dynamics. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Poziom bezpieczeństwa biologicznego
1

03Cechy charakterystyczne

Morfologia
Komórki podobne do nabłonka o mozaikowym kształcie kamienia

04Identyfikatory

Źródło
HK Mad2-LAP/H2B-mCherry (numer katalogowy Cytion 300920)
Numer identyfikacji podatkowej NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_1D65
Wkładca
Laboratorium Ellenberg (EMBL)

05Ekspresja i podatność

Ekspresja białek
Mad2-LAP/H2B-mCherry

06Postępowanie i hodowla

Pożywka hodowlana
DMEM, w: 4,5 g/l glukozy, w: 4 mM L-glutaminy, w: 3,7 g/l NaHCO3, w: 1,0 mM pirogronianu sodu (numer artykułu Cytion 820300a)
Atmosfera inkubacyjna

37°C, 5%CO2, nawilżona atmosfera.

Suplementy
Uzupełnić podłoże 10% FBS
Odczynnik dysocjacyjny
Accutase
Hodowla komórek w subkulturze
Usuń starą pożywkę z przylegających komórek i przemyj je PBS, który nie zawiera wapnia i magnezu. W przypadku kolb T25 należy użyć 3-5 ml PBS, a w przypadku kolb T75 5-10 ml. Następnie całkowicie pokryj komórki Accutase, używając 1-2 ml dla kolb T25 i 2,5 ml dla kolb T75. Pozwól komórkom inkubować w temperaturze pokojowej przez 8-10 minut, aby je oddzielić. Po inkubacji delikatnie wymieszaj komórki z 10 ml pożywki, aby ponownie je zawiesić, a następnie odwiruj przy 300xg przez 3 minuty. Odrzucić supernatant, ponownie zawiesić komórki w świeżej pożywce i przenieść je do nowych kolb zawierających już świeżą pożywkę.
Gęstość wysiewu
1 x 104 komórek/cm2
Odnawianie płynów
2 do 3 razy w tygodniu
Powrót do stanu sprzed rozmrożenia
Po rozmrożeniu umieść komórki na płytce w ilości 5 x 104 komórek/cm2 i pozostaw je na co najmniej 24 godziny, aby mogły się zregenerować po procesie zamrażania i przylgnąć do podłoża.
Rozmrażanie i hodowla
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kontrola jakości i kriokonserwacja

Bezpłodność

Zanieczyszczenie mykoplazmą jest wykluczane przy użyciu zarówno testów opartych na PCR, jak i metod wykrywania mykoplazmy opartych na luminescencji.

Aby upewnić się, że nie ma zanieczyszczenia bakteriami, grzybami lub drożdżami, hodowle komórkowe są poddawane codziennym kontrolom wizualnym.

Pożywka do zamrażania
Jako pożywki do kriokonserwacji używamy kompletnej pożywki wzrostowej (w tym FBS) + 10% DMSO w celu zapewnienia odpowiedniej żywotności po rozmrożeniu lub CM-1 (numer katalogowy Cytion 800100), która zawiera zoptymalizowane osmoprotektanty i stabilizatory metaboliczne w celu zwiększenia regeneracji i zmniejszenia stresu wywołanego kriokonserwacją.
Warunki przechowywania

W celu długotrwałego przechowywania należy umieścić fiolki w ciekłym azocie w fazie lotnej w temperaturze od -150 do -196 °C. Przechowywanie w temperaturze -80 °C jest dopuszczalne tylko jako krótki etap przejściowy przed przeniesieniem do ciekłego azotu.

Warunki wysyłki

Linie komórkowe poddane kriokonserwacji są wysyłane w suchym lodzie w zatwierdzonych, izolowanych opakowaniach z wystarczającą ilością czynnika chłodniczego, aby utrzymać temperaturę około -78°C przez cały czas transportu. Po otrzymaniu przesyłki należy natychmiast sprawdzić pojemnik i bezzwłocznie przenieść fiolki do odpowiedniego miejsca przechowywania.

08Darczyńca

Wiek dawcy
30 lat
Pochodzenie etniczne
Afroamerykanin