Перейти до вмісту
HK Mad2-LAP/H2B-mCherry
Тканина
Шийка матки
Хвороба
Карцинома
Синоніми
HeLa Kyoto Mad2-LAP and H2B-mCherry, HeLa Kyoto Mad2-LAP

Документи

HK Mad2-LAP/H2B-mCherry

Cell line · Номер товару 300920

The HK Mad2-LAP/H2B-mCherry cell line is a genetically engineered cell model extensively utilized for studying chromosome segregation and the spindle asse...

€800.00без урахування податків та вартості доставки
Є в наявності
Лот
Рекомендовано (найсвіжіша партія)
  • CoA
1

01Загальна інформація

Опис

Клітинна лінія HK Mad2-LAP/H2B-mCherry - це генно-інженерна клітинна модель, яка широко використовується для вивчення сегрегації хромосом і контрольної точки веретена поділу під час мітозу. Ці клітини отримані з клітин HeLa Kyoto, стійкої лінії клітин людини, отриманої з карциноми шийки матки. HK Mad2-LAP (LAP-мічений Mad2) аспект клітинної лінії полегшує візуалізацію та функціональний аналіз білка Mad2, критично важливого компонента контрольної точки веретена, який запобігає настанню анафази, доки всі хромосоми не будуть належним чином вирівняні на метафазній пластинці.

Включення H2B-mCherry, де гістон H2B мічений флуоресцентним білком mCherry, дозволяє візуалізувати динаміку хроматину під час поділу клітини в режимі реального часу. Ця особливість робить клітинну лінію HK Mad2-LAP/H2B-mCherry чудовим інструментом для методів візуалізації живих клітин з високою роздільною здатністю для спостереження за рухом хромосом і мітотичною прогресією в клітинах людини за різних експериментальних умов. Використання флуоресцентних міток сприяє точному відстеженню та кількісному визначенню, тим самим надаючи цінну інформацію про молекулярні механізми, що регулюють регуляцію клітинного циклу та стабільність хромосом.

Тканина
Шийка матки
Хвороба
Карцинома
Синоніми
  • HeLa Kyoto Mad2-LAP and H2B-mCherry
  • HeLa Kyoto Mad2-LAP

02Класифікація

Організм
Людина
Секс
Жінка
Характеристики росту
Прихильник
Статус ГМО
GMO-S1
Детальна інформація щодо статусу ГМО
GMO-S1: This HeLa Kyoto line contains Mad2-LAP and H2B-mCherry constructs enabling visualization of spindle checkpoint dynamics. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Рівень біобезпеки
1

03Характеристики

Морфологія
Епітеліоподібні клітини з формою мозаїчного каменю

04Ідентифікатори

Посилання
HK Mad2-LAP/H2B-mCherry (номер за каталогом Cytion 300920)
Ідентифікаційний номер платника податків NCBI
9606
Целозавр
CVCL_1D65
Вкладник
Лабораторія Елленберга (EMBL)

05Експресія та сприйнятливість

Експресія білків
Mad2-LAP/H2B-mCherry

06Обробка та вирощування

Живильне середовище
ДМЕМ, w: 4,5 г/л Глюкоза, w: 4 мМ L-глутамін, w: 3,7 г/л NaHCO3, w: 1,0 мМ піруват натрію (цит. номер 820300a)
Атмосфера інкубації

37°C, 5% CO2, волога атмосфера.

Добавки
Додайте до середовища 10% FBS
Реагент для дисоціації
Аккутаза
Пересадка в нове середовище
Видаліть старе середовище з прилиплих клітин і промийте їх PBS, в якому бракує кальцію і магнію. Для колб T25 використовуйте 3-5 мл PBS, а для колб T75 - 5-10 мл. Потім повністю покрийте клітини аккутазою, використовуючи 1-2 мл для колб Т25 і 2,5 мл для колб Т75. Залиште клітини інкубуватися при кімнатній температурі протягом 8-10 хвилин, щоб відокремити їх. Після інкубації обережно змішайте клітини з 10 мл середовища, щоб ресуспендувати їх, а потім центрифугуйте при 300xg протягом 3 хвилин. Викиньте надосадову рідину, ресуспендуйте клітини у свіжому середовищі та перенесіть їх у нові колби, які вже містять свіже середовище.
Щільність висіву
1 x 104 клітин/см2
Оновлення рідини
2-3 рази на тиждень
Відновлення після відлиги
Після розморожування висійте клітини з щільністю 5 x 104 клітин/см2 і дайте клітинам відновитися після процесу заморожування та прикріпитися протягом щонайменше 24 годин.
Розморожування та культивування
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Контроль якості та кріоконсервація

Стерильність

Зараження мікоплазмою виключається за допомогою аналізів на основі ПЛР та люмінесцентних методів виявлення мікоплазми.

Щоб переконатися у відсутності бактеріального, грибкового або дріжджового забруднення, клітинні культури піддаються щоденному візуальному контролю.

Середовище для заморожування
Як середовище кріоконсервування ми використовуємо повне живильне середовище (включаючи FBS) + 10% ДМСО для адекватної життєздатності після відтавання або CM-1 (номер за каталогом Cytion 800100), до складу якого входять оптимізовані осмопротектори та метаболічні стабілізатори для прискорення відновлення та зменшення кріоіндукованого стресу.
Умови зберігання

Для тривалого зберігання помістіть флакони в парофазний рідкий азот при температурі від -150 до -196 °C. Зберігання при -80 °C допустиме лише як короткий проміжний етап перед перенесенням у рідкий азот.

Умови доставки

Кріоконсервовані клітинні лінії транспортуються на сухому льоду в перевіреній ізольованій упаковці з достатньою кількістю холодоагенту для підтримання температури приблизно -78 °C під час транспортування. При отриманні негайно огляньте контейнер і без зволікань перемістіть флакони у відповідне місце зберігання.

08Донор

Вік донора
30 років
Етнічна приналежність
Афроамериканець