Gå til innholdet
HK EB3-EGFP
Vev
Livmorhalsen
Sykdom
Karsinom
Synonymer
HeLa Kyoto EB3-EGFP, HeLa Kyoto EB3 EGFP, HeLa Kyoto EGFP-EB3

Dokumenter

HK EB3-EGFP

Cell line · Produktnummer 300668

Hela Kyoto EB3-EGFP is a derivative of the HeLa Kyoto cell line, specifically engineered to express the End-Binding Protein 3 (EB3) tagged with Enhanced G...

€800.00ekskl. mva. og frakt
Lite på lager
Lot
Anbefalt (det ferskeste partiet)
1

01Generell informasjon

Beskrivelse

Hela Kyoto EB3-EGFP er et derivat av HeLa Kyoto-cellelinjen, spesielt konstruert for å uttrykke End-Binding Protein 3 (EB3) merket med Enhanced Green Fluorescent Protein (EGFP). Denne cellelinjen brukes ofte i forskning som fokuserer på å forstå mikrotubulusdynamikk på grunn av den fluorescerende merkingen av EB3, et protein som assosierer seg med plussendene av mikrotubuli. Uttrykket av EGFP gir en fluorescerende markør som muliggjør sanntidsvisualisering av mikrotubuliatferd i levende celler under et fluorescensmikroskop.

Denne cellelinjen er spesielt verdifull innen cellebiologi og kreftforskning, der det er avgjørende å forstå mekanismene bak celledeling og intracellulær transport. Det stabile uttrykket av EB3-EGFP forstyrrer ikke mikrotubulienes normale funksjoner, noe som gjør disse cellene til et pålitelig verktøy for detaljerte studier av cellulære prosesser som er avhengige av mikrotubulusdynamikk.

Vev
Livmorhalsen
Sykdom
Karsinom
Synonymer
  • HeLa Kyoto EB3-EGFP
  • HeLa Kyoto EB3 EGFP
  • HeLa Kyoto EGFP-EB3

02Klassifisering

Organisme
Menneske
Sex
Kvinne
Vekstegenskaper
Tilhenger
GMO-status
GMO-S1
Detaljer om GMO-status
GMO-S1: This HeLa Kyoto EB3-EGFP line contains an EGFP-tagged EB3 construct for dynamic microtubule visualization. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Biosikkerhetsnivå
1

03Egenskaper

Morfologi
Epitel-lignende celler med mosaikksteinform

04Identifikatorer

Kildehenvisning
HK EB3-EGFP (Cytion katalognummer 300668)
NCBI-skattenummer
9606
Cellosaurus
CVCL_1D61
Innskjærer
Ellenberg-laboratoriet (EMBL)

05Uttrykk og mottakelighet

Proteinekspresjon
MEGFP (mikrotubulus endebindende protein 3 mEGFP merket): Plassering/gen: 1..589 / Pcmv, 652..1497 / EB3, 1516..2235 / EGFP, 3466..4260 / KanR/NeoR
Produkter
CMV-promotor EB3, neomycin, fosfotransferase

06Håndtering og kultur

Næringsmedium
DMEM, m: 4,5 g/L glukose, m: 4 mM L-glutamin, m: 3,7 g/L NaHCO3, m: 1,0 mM natriumpyruvat (Cytion artikkelnummer 820300a)
Inkubasjonsatmosfære

37 °C, 5 %CO2, befuktet atmosfære.

Kosttilskudd
Suppler mediet med 10 % FBS
Dissosiasjonsmiddel
Accutase
Subkultivering
Fjern det gamle mediet fra de adherente cellene, og vask dem med PBS uten kalsium og magnesium. Bruk 3-5 ml PBS for T25-kolber og 5-10 ml for T75-kolber. Dekk deretter cellene helt med Accutase, med 1-2 ml for T25-kolber og 2,5 ml for T75-kolber. La cellene inkubere i romtemperatur i 8-10 minutter for å løsne dem. Etter inkubasjon blandes cellene forsiktig med 10 ml medium for å resuspendere dem, og sentrifuger deretter ved 300xg i 3 minutter. Kast supernatanten, resuspender cellene i nytt medium, og overfør dem til nye kolber som allerede inneholder nytt medium.
Såtetthet
1 x 104 celler/cm2
Væskefornyelse
2 til 3 ganger per uke
Gjenoppretting etter tining
Etter tining, plasser cellene på 5 x 104 celler/cm2 og la cellene komme seg etter fryseprosessen og feste seg i minst 24 timer.
Tining og dyrking
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kvalitetskontroll og kryokonservering

Sterilitet

Mykoplasma-kontaminering utelukkes ved hjelp av både PCR-baserte analyser og luminescensbaserte metoder for påvisning av mykoplasma.

For å sikre at det ikke finnes bakterie-, sopp- eller gjærkontaminering, blir cellekulturene inspisert visuelt hver dag.

Frysemedium
Som kryopreserveringsmedium bruker vi komplett vekstmedium (inkludert FBS) + 10 % DMSO for tilstrekkelig levedyktighet etter opptining, eller CM-1 (Cytion-katalognummer 800100), som inneholder optimaliserte osmobeskyttende midler og metabolske stabilisatorer for å øke utvinningen og redusere kryoindusert stress.
Oppbevaringsbetingelser

For langtidsoppbevaring plasseres hetteglassene i flytende nitrogen i dampfase ved ca. -150 til -196 °C. Lagring ved -80 °C er kun akseptabelt som et kort mellomtrinn før overføring til flytende nitrogen.

Fraktvilkår

Kryopreserverte cellelinjer sendes på tørris i validert, isolert emballasje med tilstrekkelig kjølemiddel til å opprettholde en temperatur på ca. -78 °C under hele transporten. Ved mottak skal beholderen inspiseres umiddelbart, og hetteglassene skal straks overføres til egnet lagringsplass.

08Donor

Donorens alder
30 år
Etnisitet
Afroamerikaner