HK EGFP-LaminB1/H2B-mCherry

A linha celular HK EGFP-LaminB1/H2B-mCherry é um modelo in vitro derivado da Hela Kyoto, concebido para a visualização em tempo real da dinâmica da cromatina e da arquitetura nuclear em células vivas. Esta linha celular exprime duas fusões de proteínas fluorescentes: EGFP (proteína verde fluorescente melhorada) fundida com Lamin B1, e mCherry (uma proteína vermelha fluorescente) fundida com histona H2B. A fusão de EGFP com Lamin B1 permite a observação do envelope nuclear e da lâmina nuclear, estruturas críticas para a manutenção da integridade e funcionalidade do núcleo. As proteínas lamininas são proteínas de filamento intermédio do tipo V que formam uma malha subjacente à membrana nuclear interna, desempenhando papéis fundamentais na estabilidade nuclear, na organização da cromatina e na regulação dos genes.

Por outro lado, a histona H2B marcada com mCherry permite a visualização da cromatina no interior do núcleo. As histonas são componentes fundamentais do nucleossoma, envolvidas na organização do ADN em cromatina, o que as torna cruciais para a replicação, reparação e transcrição do ADN. A etiqueta mCherry na H2B fornece uma fluorescência vermelha viva que contrasta com a fluorescência verde da EGFP, permitindo a imagem dupla simultânea da estrutura nuclear e da cromatina em experiências com células vivas. Esta linha celular é normalmente utilizada em estudos centrados na mecânica nuclear, mitose e estabilidade do genoma, proporcionando uma visão dinâmica dos processos celulares que, de outro modo, são difíceis de observar em tempo real.

37°C, 5%_CO2, atmosfera humidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

A contaminação por micoplasma é excluída utilizando ensaios baseados em PCR e métodos de deteção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não há contaminação bacteriana, fúngica ou de leveduras, as culturas de células são sujeitas a inspecções visuais diárias.

Para conservação a longo prazo, colocar os frascos em azoto líquido em fase de vapor a uma temperatura entre -150 e -196 °C. O armazenamento a -80 °C é aceitável apenas como um curto passo intermédio antes da transferência para azoto líquido.

As linhas celulares criopreservadas são expedidas em gelo seco em embalagens validadas e isoladas com refrigerante suficiente para manter aproximadamente -78 °C durante o transporte. Aquando da receção, inspecionar imediatamente o recipiente e transferir sem demora os frascos para um local de armazenamento adequado.

Na Cytion, nós garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células serão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou Folha de Produto

Para mais informações, consulte a nossa <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Declaração de Garantia