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- Tissu
- Endocol
- Maladie
- Adénocarcinome
- Site métastatique
- Sans objet (lignée dérivée de HeLa Kyoto ; le site tumoral primaire est l'endocol)
Documents
HK-CRISPR-Nup188-mEGFP
Cell line · Référence du produit 300657
HK-CRISPR-Nup188-mEGFP is a genetically modified Hela Kyoto cell line. It uses CRISPR/Cas9 technology to integrate mEGFP (monomeric Enhanced Green Fluores...
Personnalisation / Recommandations
- HK-CRISPR-Nup188-mEGFPCell line€800.00
Recommandé (lot le plus récent)
01Informations générales
- Description
HK-CRISPR-Nup188-mEGFP est une lignée cellulaire Hela Kyoto génétiquement modifiée. Elle utilise la technologie CRISPR/Cas9 pour intégrer la mEGFP (protéine fluorescente verte améliorée monomérique) au locus Nup188. Nup188 est une protéine nucléoporine clé impliquée dans le complexe du pore nucléaire, essentiel pour le transport de molécules entre le noyau et le cytoplasme. Le marquage mEGFP permet la visualisation en temps réel de Nup188, ce qui facilite l'étude de la dynamique et de la fonction du complexe du pore nucléaire.
Cette lignée cellulaire est particulièrement utile pour les chercheurs qui s'intéressent au transport nucléaire et à la biologie du complexe du pore nucléaire. Son marquage fluorescent permet d'observer Nup188 dans diverses conditions, y compris les traitements médicamenteux et les modifications génétiques. Les applications comprennent le criblage à haut contenu, l'imagerie des cellules vivantes et d'autres techniques basées sur la fluorescence, fournissant des informations précieuses sur le transport nucléocytoplasmique et l'intégrité de l'enveloppe nucléaire.
- Tissu
- Endocol
- Maladie
- Adénocarcinome
- Site métastatique
- Sans objet (lignée dérivée de HeLa Kyoto ; le site tumoral primaire est l'endocol)
- Applications
- Biologie du complexe des pores nucléaires (NPC) ; transport nucléocytoplasmique ; dynamique et fonction de Nup188 ; imagerie par fluorescence de l'enveloppe nucléaire sur cellule vivante ; criblage à haut contenu ; études de validation de knock-in par CRISPR ; évaluation d'inhibiteurs du transport nucléaire
02Classification
- Organisme
- Humain
- Sexe
- Femme
- Propriétés de croissance
- Adepte
- Statut OGM
- GMO-S1
- Informations détaillées sur le statut OGM
- GMO-S1: This HeLa Kyoto line contains a CRISPR knock-in of mEGFP at the Nup188 locus, enabling visualization of nuclear pore scaffold dynamics. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
- Niveau de biosécurité
- 1
03Caractéristiques
- Morphologie
- Cellules de type épithélial avec une forme de pierre en mosaïque
- Type de cellule
- Cellules épithéliales
04Identifiants
- Référence
- HK-CRISPR-Nup188-mEGFP (numéro de catalogue Cytion 300657)
- Numéro d'identification fiscale NCBI
- 9606
- Déposant
- Le laboratoire Ellenberg (EMBL)
05Expression et sensibilité
- Expression des protéines
- Nup188, étiquette mEGFP
06Manipulation et culture
- Milieu de culture
- DMEM, w : 4.5 g/L Glucose, w : 4 mM L-Glutamine, w : 3.7 g/L NaHCO3, w : 1.0 mM Pyruvate de sodium (numéro d'article Cytion 820300a)
- Atmosphère d'incubation
37°C, 5%CO2, atmosphère humidifiée.
- Compléments alimentaires
- Compléter le milieu avec 10% de FBS
- Réactif de dissociation
- Accutase
- Repiquage
- Retirer l'ancien milieu des cellules adhérentes et les laver avec du PBS dépourvu de calcium et de magnésium. Pour les flacons T25, utiliser 3-5 ml de PBS, et pour les flacons T75, 5-10 ml. Ensuite, recouvrir complètement les cellules avec Accutase, en utilisant 1 à 2 ml pour les flacons T25 et 2,5 ml pour les flacons T75. Laisser les cellules incuber à température ambiante pendant 8-10 minutes pour les détacher. Après incubation, mélanger délicatement les cellules avec 10 ml de milieu pour les remettre en suspension, puis centrifuger à 300xg pendant 3 minutes. Jeter le surnageant, remettre les cellules en suspension dans du milieu frais et les transférer dans de nouveaux flacons contenant déjà du milieu frais.
- Décongélation et mise en culture
Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.
Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.
For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.
Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.
Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.
Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.
Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.
Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.
07Contrôle qualité et cryoconservation
- Stérilité
La contamination par les mycoplasmes est exclue à l'aide de tests basés sur la PCR et de méthodes de détection des mycoplasmes basées sur la luminescence.
Pour s'assurer de l'absence de contamination bactérienne, fongique ou levurienne, les cultures cellulaires font l'objet d'inspections visuelles quotidiennes.
- Milieu de congélation
- Comme milieu de cryoconservation, nous utilisons un milieu de croissance complet (comprenant du FBS) + 10 % de DMSO pour une viabilité adéquate après décongélation, ou CM-1 (numéro de catalogue 800100 de Cytion), qui comprend des osmoprotectants et des stabilisateurs métaboliques optimisés pour améliorer la récupération et réduire le stress induit par la cryogénisation.
- Conditions de stockage
Pour une conservation à long terme, placer les flacons dans de l'azote liquide en phase vapeur à une température comprise entre -150 et -196 °C environ. Le stockage à -80 °C n'est acceptable qu'en tant qu'étape intermédiaire de courte durée avant le transfert dans l'azote liquide.
- Conditions de livraison
Les lignées cellulaires cryoconservées sont expédiées sur glace sèche dans des emballages isolés et validés, avec suffisamment de réfrigérant pour maintenir une température d'environ -78 °C tout au long du transport. À la réception, inspecter immédiatement le conteneur et transférer sans délai les flacons dans un lieu de stockage approprié.
08Donateur
- Âge du donneur
- 30 ans
- Origine ethnique
- Afro-américain
09Aspects juridiques et sécurité
- Consignes de sécurité
- Lorsque l'on envisage de stocker un cryovial dans l'azote liquide en vue d'une décongélation ultérieure, il est obligatoire de respecter des mesures de sécurité rigoureuses. Des gants et des vêtements de protection appropriés sont indispensables, et l'utilisation d'un masque facial ou de lunettes de sécurité est requise pendant le transfert des échantillons congelés vers ou depuis le réservoir d'azote liquide. Ceci afin de réduire le risque de blessures dues à l'explosion potentielle des cryoviaux lors de leur retrait, qui peut entraîner la projection de fragments tranchants.
- Garantie
Chez Cytion, nous nous portons garants de la qualité et de la viabilité de nos produits. Nous garantissons que nos cellules seront viables au début de la culture pendant 60 jours après l'expédition de nos installations. Nous assurons que tous les matériaux sont conformes aux spécifications décrites dans le certificat d'analyse et/ou la fiche produit
Pour plus de détails, veuillez consulter notre <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default""> Déclaration de garantie
- Les accords conclus avec des tiers s'appliquent
- Oui