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HK-CRISPR-Nup188-mEGFP
Tissu
Endocol
Maladie
Adénocarcinome
Site métastatique
Sans objet (lignée dérivée de HeLa Kyoto ; le site tumoral primaire est l'endocol)

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HK-CRISPR-Nup188-mEGFP

Cell line · Référence du produit 300657

HK-CRISPR-Nup188-mEGFP is a genetically modified Hela Kyoto cell line. It uses CRISPR/Cas9 technology to integrate mEGFP (monomeric Enhanced Green Fluores...

€800.00hors taxes et frais de port
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Recommandé (lot le plus récent)
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1

01Informations générales

Description

HK-CRISPR-Nup188-mEGFP est une lignée cellulaire Hela Kyoto génétiquement modifiée. Elle utilise la technologie CRISPR/Cas9 pour intégrer la mEGFP (protéine fluorescente verte améliorée monomérique) au locus Nup188. Nup188 est une protéine nucléoporine clé impliquée dans le complexe du pore nucléaire, essentiel pour le transport de molécules entre le noyau et le cytoplasme. Le marquage mEGFP permet la visualisation en temps réel de Nup188, ce qui facilite l'étude de la dynamique et de la fonction du complexe du pore nucléaire.

Cette lignée cellulaire est particulièrement utile pour les chercheurs qui s'intéressent au transport nucléaire et à la biologie du complexe du pore nucléaire. Son marquage fluorescent permet d'observer Nup188 dans diverses conditions, y compris les traitements médicamenteux et les modifications génétiques. Les applications comprennent le criblage à haut contenu, l'imagerie des cellules vivantes et d'autres techniques basées sur la fluorescence, fournissant des informations précieuses sur le transport nucléocytoplasmique et l'intégrité de l'enveloppe nucléaire.

Tissu
Endocol
Maladie
Adénocarcinome
Site métastatique
Sans objet (lignée dérivée de HeLa Kyoto ; le site tumoral primaire est l'endocol)
Applications
Biologie du complexe des pores nucléaires (NPC) ; transport nucléocytoplasmique ; dynamique et fonction de Nup188 ; imagerie par fluorescence de l'enveloppe nucléaire sur cellule vivante ; criblage à haut contenu ; études de validation de knock-in par CRISPR ; évaluation d'inhibiteurs du transport nucléaire

02Classification

Organisme
Humain
Sexe
Femme
Propriétés de croissance
Adepte
Statut OGM
GMO-S1
Informations détaillées sur le statut OGM
GMO-S1: This HeLa Kyoto line contains a CRISPR knock-in of mEGFP at the Nup188 locus, enabling visualization of nuclear pore scaffold dynamics. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Niveau de biosécurité
1

03Caractéristiques

Morphologie
Cellules de type épithélial avec une forme de pierre en mosaïque
Type de cellule
Cellules épithéliales

04Identifiants

Référence
HK-CRISPR-Nup188-mEGFP (numéro de catalogue Cytion 300657)
Numéro d'identification fiscale NCBI
9606
Déposant
Le laboratoire Ellenberg (EMBL)

05Expression et sensibilité

Expression des protéines
Nup188, étiquette mEGFP

06Manipulation et culture

Milieu de culture
DMEM, w : 4.5 g/L Glucose, w : 4 mM L-Glutamine, w : 3.7 g/L NaHCO3, w : 1.0 mM Pyruvate de sodium (numéro d'article Cytion 820300a)
Atmosphère d'incubation

37°C, 5%CO2, atmosphère humidifiée.

Compléments alimentaires
Compléter le milieu avec 10% de FBS
Réactif de dissociation
Accutase
Repiquage
Retirer l'ancien milieu des cellules adhérentes et les laver avec du PBS dépourvu de calcium et de magnésium. Pour les flacons T25, utiliser 3-5 ml de PBS, et pour les flacons T75, 5-10 ml. Ensuite, recouvrir complètement les cellules avec Accutase, en utilisant 1 à 2 ml pour les flacons T25 et 2,5 ml pour les flacons T75. Laisser les cellules incuber à température ambiante pendant 8-10 minutes pour les détacher. Après incubation, mélanger délicatement les cellules avec 10 ml de milieu pour les remettre en suspension, puis centrifuger à 300xg pendant 3 minutes. Jeter le surnageant, remettre les cellules en suspension dans du milieu frais et les transférer dans de nouveaux flacons contenant déjà du milieu frais.
Décongélation et mise en culture
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Contrôle qualité et cryoconservation

Stérilité

La contamination par les mycoplasmes est exclue à l'aide de tests basés sur la PCR et de méthodes de détection des mycoplasmes basées sur la luminescence.

Pour s'assurer de l'absence de contamination bactérienne, fongique ou levurienne, les cultures cellulaires font l'objet d'inspections visuelles quotidiennes.

Milieu de congélation
Comme milieu de cryoconservation, nous utilisons un milieu de croissance complet (comprenant du FBS) + 10 % de DMSO pour une viabilité adéquate après décongélation, ou CM-1 (numéro de catalogue 800100 de Cytion), qui comprend des osmoprotectants et des stabilisateurs métaboliques optimisés pour améliorer la récupération et réduire le stress induit par la cryogénisation.
Conditions de stockage

Pour une conservation à long terme, placer les flacons dans de l'azote liquide en phase vapeur à une température comprise entre -150 et -196 °C environ. Le stockage à -80 °C n'est acceptable qu'en tant qu'étape intermédiaire de courte durée avant le transfert dans l'azote liquide.

Conditions de livraison

Les lignées cellulaires cryoconservées sont expédiées sur glace sèche dans des emballages isolés et validés, avec suffisamment de réfrigérant pour maintenir une température d'environ -78 °C tout au long du transport. À la réception, inspecter immédiatement le conteneur et transférer sans délai les flacons dans un lieu de stockage approprié.

08Donateur

Âge du donneur
30 ans
Origine ethnique
Afro-américain