Gå direkte til indholdet
HK-CRISPR-Nup188-mEGFP
Væv
Endocervix
Sygdom
Adenokarcinom
Metastasested
Ikke relevant (HeLa Kyoto-derivat; primærtumorens placering er endocervix)

Dokumenter

HK-CRISPR-Nup188-mEGFP

Cell line · Varenummer 300657

HK-CRISPR-Nup188-mEGFP is a genetically modified Hela Kyoto cell line. It uses CRISPR/Cas9 technology to integrate mEGFP (monomeric Enhanced Green Fluores...

€800.00ekskl. moms og fragt
På lager
Lot
Anbefalet (det nyeste parti)
  • CoA
1

01Generelle oplysninger

Beskrivelse

HK-CRISPR-Nup188-mEGFP er en genetisk modificeret Hela Kyoto-cellelinje. Den bruger CRISPR/Cas9-teknologi til at integrere mEGFP (monomeric Enhanced Green Fluorescent Protein) i Nup188-locus. Nup188 er et vigtigt nukleoporinprotein, der er involveret i kerneporekomplekset, som er afgørende for molekyltransporten mellem kernen og cytoplasmaet. MEGFP-mærkningen giver mulighed for realtidsvisualisering af Nup188, hvilket hjælper med at studere kerneporekompleksets dynamik og funktion.

Denne cellelinje er særlig nyttig for forskere, der fokuserer på nuklear transport og nuklear porekompleksbiologi. Dens fluorescerende mærkning gør det muligt at observere Nup188 under forskellige forhold, herunder lægemiddelbehandlinger og genetiske modifikationer. Anvendelserne omfatter screening med højt indhold, billeddannelse af levende celler og andre fluorescensbaserede teknikker, der giver værdifuld indsigt i nukleocytoplasmatisk transport og nuklear kuvertintegritet.

Væv
Endocervix
Sygdom
Adenokarcinom
Metastasested
Ikke relevant (HeLa Kyoto-derivat; primærtumorens placering er endocervix)
Anvendelser
Biologi vedrørende kerneporekomplekset (NPC); transport mellem kerne og cytoplasma; Nup188’s dynamik og funktion; fluorescensbilleddannelse af kernemembranen i levende celler; high-content-screening; valideringsundersøgelser af CRISPR-knock-in; evaluering af hæmmere af kernetransport

02Klassificering

Organisme
Menneske
Køn
Kvinde
Vækstegenskaber
Tilhænger
GMO-status
GMO-S1
Oplysninger om GMO-status
GMO-S1: This HeLa Kyoto line contains a CRISPR knock-in of mEGFP at the Nup188 locus, enabling visualization of nuclear pore scaffold dynamics. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Biosikkerhedsniveau
1

03Egenskaber

Morfologi
Epithel-lignende celler med mosaikstenform
Celletype
Epitheliale celler

04Identifikatorer

Kildehenvisning
HK-CRISPR-Nup188-mEGFP (Cytion katalognummer 300657)
NCBI-skattenummer
9606
Indskyder
Ellenberg-laboratoriet (EMBL)

05Udtryk og modtagelighed

Proteinekspression
Nup188, mEGFP-tag

06Håndtering og opdræt

Næringsmedium
DMEM, w: 4,5 g/L glukose, w: 4 mM L-glutamin, w: 3,7 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM natriumpyruvat (Cytion artikelnummer 820300a)
Inkubationsatmosfære

37°C, 5%CO2, befugtet atmosfære.

Kosttilskud
Suppler mediet med 10% FBS
Dissociationsreagens
Accutase
Oddyrkning
Fjern det gamle medium fra de klæbende celler, og vask dem med PBS, der ikke indeholder calcium og magnesium. Brug 3-5 ml PBS til T25-kolber og 5-10 ml til T75-kolber. Dæk derefter cellerne helt med Accutase, brug 1-2 ml til T25-kolber og 2,5 ml til T75-kolber. Lad cellerne inkubere ved stuetemperatur i 8-10 minutter for at løsne dem. Efter inkubationen blandes cellerne forsigtigt med 10 ml medium for at resuspendere dem, og centrifugeres derefter ved 300xg i 3 minutter. Kassér supernatanten, resuspender cellerne i frisk medium, og overfør dem til nye kolber, der allerede indeholder frisk medium.
Optøning og dyrkning
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kvalitetskontrol og kryopræservering

Sterilitet

Mycoplasma-kontaminering udelukkes ved hjælp af både PCR-baserede assays og luminescensbaserede mycoplasma-detektionsmetoder.

For at sikre, at der ikke er nogen bakterie-, svampe- eller gærforurening, underkastes cellekulturerne daglige visuelle inspektioner.

Frysemedium
Som kryopræserveringsmedium bruger vi komplet vækstmedium (inklusive FBS) + 10 % DMSO for tilstrækkelig levedygtighed efter optøning eller CM-1 (Cytion-katalognummer 800100), som indeholder optimerede osmobeskyttende stoffer og metaboliske stabilisatorer for at forbedre genopretningen og reducere kryo-induceret stress.
Opbevaringsbetingelser

For langtidsopbevaring anbringes hætteglas i flydende nitrogen i dampfase ved ca. -150 til -196 °C. Opbevaring ved -80 °C er kun acceptabelt som et kort mellemtrin før overførsel til flydende nitrogen.

Leveringsbetingelser

Kryopræserverede cellelinjer sendes på tøris i valideret, isoleret emballage med tilstrækkeligt kølemiddel til at opretholde ca. -78 °C under hele transporten. Ved modtagelse skal beholderen straks inspiceres, og hætteglassene skal straks overføres til passende opbevaring.

08Donor

Donorens alder
30 år
Etnisk tilhørsforhold
Afroamerikaner