.jpg)
- Weefsel
- Endocervix
- Ziekte
- Adenocarcinoom
- Plaats van uitzaaiingen
- Niet van toepassing (afgeleid van HeLa Kyoto; primaire tumorlocatie is de endocervix)
Documenten
HK-CRISPR-Nup188-mEGFP
Cell line · Productnummer 300657
HK-CRISPR-Nup188-mEGFP is a genetically modified Hela Kyoto cell line. It uses CRISPR/Cas9 technology to integrate mEGFP (monomeric Enhanced Green Fluores...
Maatwerk / Aanbevelingen
- HK-CRISPR-Nup188-mEGFPCell line€800.00
Aanbevolen (verste partij)
01Algemene informatie
- Beschrijving
HK-CRISPR-Nup188-mEGFP is een genetisch gemodificeerde Hela Kyoto cellijn. Deze maakt gebruik van CRISPR/Cas9-technologie om mEGFP (monomeric Enhanced Green Fluorescent Protein) te integreren in de Nup188-locus. Nup188 is een belangrijk nucleoporine-eiwit dat betrokken is bij het nucleaire poriëncomplex, dat essentieel is voor het transport van moleculen tussen de kern en het cytoplasma. De mEGFP tagging maakt real-time visualisatie van Nup188 mogelijk, wat helpt bij het bestuderen van de dynamiek en functie van het nucleaire poriecomplex.
Deze cellijn is vooral nuttig voor onderzoekers die zich richten op nucleair transport en de biologie van het nucleaire poriecomplex. De fluorescerende tagging maakt observatie van Nup188 onder verschillende omstandigheden mogelijk, waaronder behandelingen met medicijnen en genetische modificaties. Toepassingen zijn onder andere high-content screening, live-cell imaging en andere op fluorescentie gebaseerde technieken, die waardevolle inzichten verschaffen in nucleocytoplasmatisch transport en de integriteit van de nucleaire envelop.
- Weefsel
- Endocervix
- Ziekte
- Adenocarcinoom
- Plaats van uitzaaiingen
- Niet van toepassing (afgeleid van HeLa Kyoto; primaire tumorlocatie is de endocervix)
- Toepassingen
- Biologie van het nucleaire poriëncomplex (NPC); transport tussen kern en cytoplasma; dynamiek en functie van Nup188; fluorescentiebeeldvorming van de kernmembraan in levende cellen; high-content screening; validatiestudies van CRISPR-knock-in; evaluatie van remmers van het transport door de kern
02Classificatie
- Organisme
- Mens
- Seks
- Vrouw
- Groei-eigenschappen
- Aanhanger
- GGO-status
- GMO-S1
- Details over de GGO-status
- GMO-S1: This HeLa Kyoto line contains a CRISPR knock-in of mEGFP at the Nup188 locus, enabling visualization of nuclear pore scaffold dynamics. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
- Bioveiligheidsniveau
- 1
03Kenmerken
- Morfologie
- Epitheelachtige cellen met mozaïeksteenvorm
- Celtype
- Epitheelcellen
04Identificatiegegevens
- Bronvermelding
- HK-CRISPR-Nup188-mEGFP (Cytion catalogusnummer 300657)
- NCBI-belastingnummer
- 9606
- Inlegger
- Het Ellenberg Lab (EMBL)
05Expressie en vatbaarheid
- Eiwit-expressie
- Nup188, mEGFP-tag
06Behandeling en kweek
- Kweekmedium
- DMEM, w: 4,5 g/L Glucose, w: 4 mM L-Glutamine, w: 3,7 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM Natriumpyruvaat (Cytion artikelnummer 820300a)
- Incubatieomgeving
37°C, 5%CO2, bevochtigde atmosfeer.
- Supplementen
- Vul het medium aan met 10% FBS
- Dissociatiereagens
- Accutase
- Heruitplanten
- Verwijder het oude medium van de adherente cellen en was ze met PBS zonder calcium en magnesium. Gebruik voor T25-flesjes 3-5 ml PBS en voor T75-flesjes 5-10 ml. Bedek de cellen vervolgens volledig met Accutase, met 1-2 ml voor T25-flesjes en 2,5 ml voor T75-flesjes. Laat de cellen gedurende 8-10 minuten bij kamertemperatuur incuberen om ze los te maken. Na incubatie de cellen voorzichtig mengen met 10 ml medium om ze te resuspenderen en vervolgens centrifugeren bij 300xg gedurende 3 minuten. Gooi het supernatant weg, resuspendeer de cellen in vers medium en breng ze over in nieuwe kolven die al vers medium bevatten.
- Ontdooien en kweken
Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.
Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.
For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.
Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.
Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.
Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.
Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.
Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.
07Kwaliteitscontrole en cryopreservatie
- Onvruchtbaarheid
Mycoplasmaverontreiniging wordt uitgesloten met zowel PCR-gebaseerde testen als op luminescentie gebaseerde mycoplasmadetectiemethoden.
Om er zeker van te zijn dat er geen besmetting is met bacteriën, schimmels of gisten, worden de celculturen dagelijks onderworpen aan visuele inspecties.
- Kweekmedium invriezen
- Als cryoconserveringsmedium gebruiken we volledig groeimedium (inclusief FBS) + 10% DMSO voor voldoende levensvatbaarheid na het ontdooien, of CM-1 (Cytion catalogusnummer 800100), dat geoptimaliseerde osmoprotectanten en metabolische stabilisatoren bevat om het herstel te verbeteren en door cryo geïnduceerde stress te verminderen.
- Opslagvoorwaarden
Voor langdurige bewaring plaatst u flesjes in vloeibare stikstof in dampfase bij ongeveer -150 tot -196 °C. Opslag bij -80 °C is alleen aanvaardbaar als korte tussenstap vóór overbrenging naar vloeibare stikstof.
- Verzendvoorwaarden
Gecryopreserveerde cellijnen worden verzonden op droog ijs in gevalideerde, geïsoleerde verpakkingen met voldoende koelmiddel om gedurende het transport ongeveer -78 °C te handhaven. Inspecteer de verpakking onmiddellijk na ontvangst en breng de flacons onverwijld over naar de juiste opslagplaats.
08Donateur
- Leeftijd van de donor
- 30 jaar
- Etnische afkomst
- Afro-Amerikaan
09Juridische en veiligheidsaspecten
- Veiligheidsmaatregelen
- Wanneer men van plan is om een cryovial in vloeibare stikstof op te slaan om later te ontdooien, is het verplicht om strenge veiligheidsmaatregelen in acht te nemen. Passende beschermende handschoenen en kleding zijn essentieel en het gebruik van een gezichtsmasker of veiligheidsbril is vereist tijdens het overbrengen van bevroren monsters naar of uit de tank met vloeibare stikstof. Dit is om het risico op letsel door mogelijke cryoviale explosies bij het verwijderen te beperken, wat kan resulteren in de projectie van scherpe fragmenten.
- Garantie
Bij Cytion staan we achter de kwaliteit en levensvatbaarheid van onze producten. We garanderen dat onze cellen levensvatbaar zijn bij het begin van de kweek gedurende 60 dagen na verzending vanuit onze faciliteiten. We verzekeren dat alle materialen voldoen aan de specificaties beschreven in het analysecertificaat en/of productblad
Raadpleeg voor volledige informatie onze <a href=""/Wie-zijn-wij/Garantie/"" hreflang=""x-default"">Garantieverklaring
- Er gelden overeenkomsten met derden
- Ja