Ga naar de inhoud
HK-CRISPR-Nup188-mEGFP
Weefsel
Endocervix
Ziekte
Adenocarcinoom
Plaats van uitzaaiingen
Niet van toepassing (afgeleid van HeLa Kyoto; primaire tumorlocatie is de endocervix)

Documenten

HK-CRISPR-Nup188-mEGFP

Cell line · Productnummer 300657

HK-CRISPR-Nup188-mEGFP is a genetically modified Hela Kyoto cell line. It uses CRISPR/Cas9 technology to integrate mEGFP (monomeric Enhanced Green Fluores...

€800.00excl. btw en verzendkosten

Maatwerk / Aanbevelingen

Op voorraad
Lot
Aanbevolen (verste partij)
  • CoA
1

01Algemene informatie

Beschrijving

HK-CRISPR-Nup188-mEGFP is een genetisch gemodificeerde Hela Kyoto cellijn. Deze maakt gebruik van CRISPR/Cas9-technologie om mEGFP (monomeric Enhanced Green Fluorescent Protein) te integreren in de Nup188-locus. Nup188 is een belangrijk nucleoporine-eiwit dat betrokken is bij het nucleaire poriëncomplex, dat essentieel is voor het transport van moleculen tussen de kern en het cytoplasma. De mEGFP tagging maakt real-time visualisatie van Nup188 mogelijk, wat helpt bij het bestuderen van de dynamiek en functie van het nucleaire poriecomplex.

Deze cellijn is vooral nuttig voor onderzoekers die zich richten op nucleair transport en de biologie van het nucleaire poriecomplex. De fluorescerende tagging maakt observatie van Nup188 onder verschillende omstandigheden mogelijk, waaronder behandelingen met medicijnen en genetische modificaties. Toepassingen zijn onder andere high-content screening, live-cell imaging en andere op fluorescentie gebaseerde technieken, die waardevolle inzichten verschaffen in nucleocytoplasmatisch transport en de integriteit van de nucleaire envelop.

Weefsel
Endocervix
Ziekte
Adenocarcinoom
Plaats van uitzaaiingen
Niet van toepassing (afgeleid van HeLa Kyoto; primaire tumorlocatie is de endocervix)
Toepassingen
Biologie van het nucleaire poriëncomplex (NPC); transport tussen kern en cytoplasma; dynamiek en functie van Nup188; fluorescentiebeeldvorming van de kernmembraan in levende cellen; high-content screening; validatiestudies van CRISPR-knock-in; evaluatie van remmers van het transport door de kern

02Classificatie

Organisme
Mens
Seks
Vrouw
Groei-eigenschappen
Aanhanger
GGO-status
GMO-S1
Details over de GGO-status
GMO-S1: This HeLa Kyoto line contains a CRISPR knock-in of mEGFP at the Nup188 locus, enabling visualization of nuclear pore scaffold dynamics. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Bioveiligheidsniveau
1

03Kenmerken

Morfologie
Epitheelachtige cellen met mozaïeksteenvorm
Celtype
Epitheelcellen

04Identificatiegegevens

Bronvermelding
HK-CRISPR-Nup188-mEGFP (Cytion catalogusnummer 300657)
NCBI-belastingnummer
9606
Inlegger
Het Ellenberg Lab (EMBL)

05Expressie en vatbaarheid

Eiwit-expressie
Nup188, mEGFP-tag

06Behandeling en kweek

Kweekmedium
DMEM, w: 4,5 g/L Glucose, w: 4 mM L-Glutamine, w: 3,7 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM Natriumpyruvaat (Cytion artikelnummer 820300a)
Incubatieomgeving

37°C, 5%CO2, bevochtigde atmosfeer.

Supplementen
Vul het medium aan met 10% FBS
Dissociatiereagens
Accutase
Heruitplanten
Verwijder het oude medium van de adherente cellen en was ze met PBS zonder calcium en magnesium. Gebruik voor T25-flesjes 3-5 ml PBS en voor T75-flesjes 5-10 ml. Bedek de cellen vervolgens volledig met Accutase, met 1-2 ml voor T25-flesjes en 2,5 ml voor T75-flesjes. Laat de cellen gedurende 8-10 minuten bij kamertemperatuur incuberen om ze los te maken. Na incubatie de cellen voorzichtig mengen met 10 ml medium om ze te resuspenderen en vervolgens centrifugeren bij 300xg gedurende 3 minuten. Gooi het supernatant weg, resuspendeer de cellen in vers medium en breng ze over in nieuwe kolven die al vers medium bevatten.
Ontdooien en kweken
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kwaliteitscontrole en cryopreservatie

Onvruchtbaarheid

Mycoplasmaverontreiniging wordt uitgesloten met zowel PCR-gebaseerde testen als op luminescentie gebaseerde mycoplasmadetectiemethoden.

Om er zeker van te zijn dat er geen besmetting is met bacteriën, schimmels of gisten, worden de celculturen dagelijks onderworpen aan visuele inspecties.

Kweekmedium invriezen
Als cryoconserveringsmedium gebruiken we volledig groeimedium (inclusief FBS) + 10% DMSO voor voldoende levensvatbaarheid na het ontdooien, of CM-1 (Cytion catalogusnummer 800100), dat geoptimaliseerde osmoprotectanten en metabolische stabilisatoren bevat om het herstel te verbeteren en door cryo geïnduceerde stress te verminderen.
Opslagvoorwaarden

Voor langdurige bewaring plaatst u flesjes in vloeibare stikstof in dampfase bij ongeveer -150 tot -196 °C. Opslag bij -80 °C is alleen aanvaardbaar als korte tussenstap vóór overbrenging naar vloeibare stikstof.

Verzendvoorwaarden

Gecryopreserveerde cellijnen worden verzonden op droog ijs in gevalideerde, geïsoleerde verpakkingen met voldoende koelmiddel om gedurende het transport ongeveer -78 °C te handhaven. Inspecteer de verpakking onmiddellijk na ontvangst en breng de flacons onverwijld over naar de juiste opslagplaats.

08Donateur

Leeftijd van de donor
30 jaar
Etnische afkomst
Afro-Amerikaan