Langsung ke isi
HK-CRISPR-Nup188-mEGFP
Tisu
Endoserviks
Penyakit
Adenokarsinoma
Lokasi metastasis
Tidak berlaku (turunan HeLa Kyoto; lokasi tumor primer berada di endoserviks)

HK-CRISPR-Nup188-mEGFP

Cell line · Nomor produk 300657

HK-CRISPR-Nup188-mEGFP is a genetically modified Hela Kyoto cell line. It uses CRISPR/Cas9 technology to integrate mEGFP (monomeric Enhanced Green Fluores...

€800.00belum termasuk pajak dan ongkos kirim
Tersedia
Lot
Direkomendasikan (stok terbaru)
  • CoA
1

01Informasi umum

Deskripsi

HK-CRISPR-Nup188-mEGFP adalah garis sel Hela Kyoto yang dimodifikasi secara genetik. Ini menggunakan teknologi CRISPR / Cas9 untuk mengintegrasikan mEGFP (monomer Enhanced Green Fluorescent Protein) di lokus Nup188. Nup188 adalah protein nukleoporin utama yang terlibat dalam kompleks pori nuklir, yang penting untuk transportasi molekul antara nukleus dan sitoplasma. Penandaan mEGFP memungkinkan visualisasi Nup188 secara real-time, membantu dalam mempelajari dinamika dan fungsi kompleks pori nuklir.

Garis sel ini sangat berguna bagi para peneliti yang berfokus pada transportasi nuklir dan biologi kompleks pori nuklir. Penandaan fluoresennya memungkinkan pengamatan Nup188 dalam berbagai kondisi, termasuk perawatan obat dan modifikasi genetik. Aplikasi termasuk penyaringan konten tinggi, pencitraan sel hidup, dan teknik berbasis fluoresensi lainnya, memberikan wawasan berharga tentang transpor nukleositoplasma dan integritas selubung nuklir.

Tisu
Endoserviks
Penyakit
Adenokarsinoma
Lokasi metastasis
Tidak berlaku (turunan HeLa Kyoto; lokasi tumor primer berada di endoserviks)
Aplikasi
Biologi kompleks pori nukleus (NPC); transportasi nukleositoplasmik; dinamika dan fungsi Nup188; pencitraan fluoresensi sel hidup pada selubung nukleus; penyaringan berkonten tinggi; studi validasi knock-in CRISPR; evaluasi penghambat transportasi nukleus

02Klasifikasi

Organisme
Manusia
Seks
Perempuan
Sifat-sifat pertumbuhan
Pengikut
Status GMO
GMO-S1
Rincian status GMO
GMO-S1: This HeLa Kyoto line contains a CRISPR knock-in of mEGFP at the Nup188 locus, enabling visualization of nuclear pore scaffold dynamics. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Tingkat keamanan hayati
1

03Karakteristik

Morfologi
Sel mirip epitel dengan bentuk batu mosaik
Jenis sel
Sel epitel

04Pengidentifikasi

Referensi
HK-CRISPR-Nup188-mEGFP (Nomor katalog Cytion 300657)
Nomor Identifikasi Pajak NCBI
9606
Nasabah penyimpanan
Laboratorium Ellenberg (Ellenberg Lab) (EMBL)

05Ekspresi dan kerentanan

Ekspresi protein
Nup188, mEGFP-tag

06Penanganan dan budidaya

Media kultur
DMEM, w: 4,5 g/L Glukosa, w: 4 mM L-Glutamin, w: 3,7 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM Natrium piruvat (Nomor artikel Cytion 820300a)
Suasana inkubasi

37°C, 5%CO2, atmosfer yang dilembabkan.

Suplemen
Tambahkan media dengan 10% FBS
Reagen disosiasi
Accutase
Perbanyakan sel
Buang media lama dari sel yang melekat dan cuci dengan PBS yang tidak mengandung kalsium dan magnesium. Untuk labu T25, gunakan 3-5 ml PBS, dan untuk labu T75, gunakan 5-10 ml. Kemudian, tutupi sel sepenuhnya dengan Accutase, menggunakan 1-2 ml untuk labu T25 dan 2,5 ml untuk labu T75. Biarkan sel diinkubasi pada suhu kamar selama 8-10 menit untuk melepaskannya. Setelah inkubasi, campurkan sel secara perlahan dengan 10 ml medium untuk meresuspensi sel, kemudian sentrifugasi pada 300xg selama 3 menit. Buang supernatan, resuspensi sel dalam medium segar, dan pindahkan ke dalam labu baru yang sudah berisi medium segar.
Pencairan dan pembiakan
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Pengendalian mutu dan kriopreservasi

Kemandulan

Kontaminasi mikoplasma disingkirkan dengan menggunakan tes berbasis PCR dan metode deteksi mikoplasma berbasis pendaran.

Untuk memastikan tidak ada kontaminasi bakteri, jamur, atau ragi, kultur sel menjalani inspeksi visual setiap hari.

Media pembekuan
Sebagai media kriopreservasi, kami menggunakan media pertumbuhan lengkap (termasuk FBS) + 10% DMSO untuk viabilitas pasca-pencairan yang memadai, atau CM-1 (nomor katalog Cytion 800100), yang mencakup osmoprotektan yang dioptimalkan dan penstabil metabolisme untuk meningkatkan pemulihan dan mengurangi stres yang diinduksi kriopreservasi.
Kondisi penyimpanan

Untuk pengawetan jangka panjang, tempatkan botol dalam nitrogen cair fase uap pada suhu sekitar -150 hingga -196 °C. Penyimpanan pada suhu -80 °C hanya dapat diterima sebagai langkah sementara sebelum dipindahkan ke nitrogen cair.

Ketentuan pengiriman

Lini sel kriopreservasi dikirim di atas es kering dalam kemasan terisolasi yang divalidasi dengan refrigeran yang cukup untuk mempertahankan suhu sekitar -78 ° C selama perjalanan. Setelah diterima, segera periksa wadah dan pindahkan botol tanpa penundaan ke tempat penyimpanan yang sesuai.

08Donatur

Usia donor
30 tahun
Etnis
Afrika-Amerika