Prejsť na obsah
HK-CRISPR-Nup188-mEGFP
Tkanivo
Endocervix
Choroba
Adenokarcinóm
Miesto metastáz
Neplatí (derivát HeLa Kyoto; primárne ložisko nádoru sa nachádza v endocervikálnej oblasti)

Dokumenty

HK-CRISPR-Nup188-mEGFP

Cell line · Číslo výrobku 300657

HK-CRISPR-Nup188-mEGFP is a genetically modified Hela Kyoto cell line. It uses CRISPR/Cas9 technology to integrate mEGFP (monomeric Enhanced Green Fluores...

€800.00bez DPH a poštovného
Na sklade
Lot
Odporúčané (najčerstvejšia várka)
  • CoA
1

01Všeobecné informácie

Popis

HK-CRISPR-Nup188-mEGFP je geneticky modifikovaná bunková línia Hela Kyoto. Využíva technológiu CRISPR/Cas9 na integráciu mEGFP (monomérneho zosilneného zeleného fluorescenčného proteínu) do lokusu Nup188. Nup188 je kľúčový nukleoporínový proteín zapojený do komplexu jadrových pórov, ktorý je nevyhnutný na prenos molekúl medzi jadrom a cytoplazmou. Označenie mEGFP umožňuje vizualizáciu Nup188 v reálnom čase, čo pomáha pri štúdiu dynamiky a funkcie komplexu jadrových pórov.

Táto bunková línia je obzvlášť užitočná pre výskumníkov zameraných na jadrový transport a biológiu komplexu jadrových pórov. Jej fluorescenčné značenie umožňuje pozorovanie Nup188 za rôznych podmienok vrátane liečby liekmi a genetických modifikácií. Aplikácie zahŕňajú skríning s vysokým obsahom, zobrazovanie živých buniek a iné techniky založené na fluorescencii, ktoré poskytujú cenné poznatky o nukleocytoplazmatickom transporte a integrite jadrového obalu.

Tkanivo
Endocervix
Choroba
Adenokarcinóm
Miesto metastáz
Neplatí (derivát HeLa Kyoto; primárne ložisko nádoru sa nachádza v endocervikálnej oblasti)
Aplikácie
Biológia komplexu jadrových pórov (NPC); nukleocytoplazmatický transport; dynamika a funkcia proteínu Nup188; fluorescenčné zobrazovanie jadrovej membrány v živých bunkách; skríning s vysokým obsahom; validačné štúdie knock-in metódou CRISPR; hodnotenie inhibítorov jadrového transportu

02Klasifikácia

Organizmus
Človek
Sex
Žena
Rastové vlastnosti
Prívrženec
Stav GMO
GMO-S1
Podrobnosti o štatúte GMO
GMO-S1: This HeLa Kyoto line contains a CRISPR knock-in of mEGFP at the Nup188 locus, enabling visualization of nuclear pore scaffold dynamics. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Úroveň biologickej bezpečnosti
1

03Charakteristiky

Morfológia
Epitelové bunky s mozaikovým tvarom kameňa
Typ bunky
Epitelové bunky

04Identifikátory

Citácia
HK-CRISPR-Nup188-mEGFP (katalógové číslo Cytion 300657)
Daňové identifikačné číslo NCBI
9606
Vkladateľ
Ellenbergova laboratória (EMBL)

05Prejav a náchylnosť

Expresia proteínov
Nup188, mEGFP-tag

06Manipulácia a kultivácia

Kultivačné médium
DMEM, w: 4,5 g/l glukózy, w: 4 mM L-glutamínu, w: 3,7 g/l NaHCO3, w: 1,0 mM pyruvátu sodného (číslo výrobku Cytion 820300a)
Inkubačná atmosféra

37 °C, 5 %CO2, zvlhčená atmosféra.

Doplnky stravy
Doplňte médium o 10 % FBS
Disociačné činidlo
Accutase
Rozmnožovanie kultúr
Odstráňte staré médium z adherovaných buniek a premyte ich PBS, ktorý neobsahuje vápnik a horčík. Pre banky T25 použite 3 - 5 ml PBS a pre banky T75 použite 5 - 10 ml. Potom bunky úplne pokryte Accutase, pričom použite 1 - 2 ml pre banky T25 a 2,5 ml pre banky T75. Nechajte bunky inkubovať pri izbovej teplote 8-10 minút, aby sa oddelili. Po inkubácii jemne premiešajte bunky s 10 ml média, aby boli znovu suspendované, a potom ich 3 minúty odstreďujte pri 300xg. Supernatant zlikvidujte, bunky znovu rozmiešajte v čerstvom médiu a preneste ich do nových fliaš, ktoré už obsahujú čerstvé médium.
Rozmrazovanie a kultivácia
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kontrola kvality a kryokonzervácia

Sterilita

Kontaminácia mykoplazmami sa vylučuje pomocou testov založených na PCR a metód detekcie mykoplaziem založených na luminiscencii.

Aby sa zabezpečilo, že nedošlo ku kontaminácii baktériami, hubami alebo kvasinkami, bunkové kultúry sa denne vizuálne kontrolujú.

Mrazové médium
Ako kryokonzervačné médium používame kompletné rastové médium (vrátane FBS) + 10 % DMSO na zabezpečenie primeranej životaschopnosti po rozmrazení alebo CM-1 (katalógové číslo 800100 spoločnosti Cytion), ktoré obsahuje optimalizované osmoprotektanty a metabolické stabilizátory na zlepšenie obnovy a zníženie stresu spôsobeného kryo.
Podmienky skladovania

Na dlhodobé uchovávanie umiestnite injekčné liekovky do kvapalnej fázy dusíka v pare pri teplote približne -150 až -196 °C. Skladovanie pri teplote -80 °C je prijateľné len ako krátky prechodný krok pred presunom do tekutého dusíka.

Dopravné podmienky

Kryokonzervované bunkové línie sa prepravujú na suchom ľade v overených, izolovaných obaloch s dostatočným množstvom chladiva na udržanie teploty približne -78 °C počas celej prepravy. Po prijatí ihneď skontrolujte obal a bezodkladne premiestnite injekčné liekovky do vhodného skladu.

08Darca

Vek darcu
30 rokov
Etnická príslušnosť
Afroameričan