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HK-CRISPR-Nup188-mEGFP
Gewebe
Endozervix
Krankheit
Adenokarzinom
Metastasenherd
Nicht zutreffend (HeLa-Kyoto-Derivat; Primärtumor befindet sich im Endozervix)

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HK-CRISPR-Nup188-mEGFP

Cell line · Artikelnummer 300657

HK-CRISPR-Nup188-mEGFP is a genetically modified Hela Kyoto cell line. It uses CRISPR/Cas9 technology to integrate mEGFP (monomeric Enhanced Green Fluores...

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01Allgemeine Informationen

Beschreibung

HK-CRISPR-Nup188-mEGFP ist eine gentechnisch veränderte Hela-Kyoto-Zelllinie. Sie nutzt die CRISPR/Cas9-Technologie, um mEGFP (monomeres Enhanced Green Fluorescent Protein) in den Nup188-Locus zu integrieren. Nup188 ist ein zentrales Nukleoporin-Protein, das am Kernporenkomplex beteiligt ist und für den Molekültransport zwischen Kern und Zytoplasma unerlässlich ist. Die mEGFP-Markierung ermöglicht die Echtzeit-Visualisierung von Nup188 und hilft bei der Untersuchung der Dynamik und Funktion des Kernporenkomplexes.

Diese Zelllinie ist besonders nützlich für Forscher, die sich mit dem Kerntransport und der Biologie des Kernporenkomplexes beschäftigen. Ihre fluoreszierende Markierung ermöglicht die Beobachtung von Nup188 unter verschiedenen Bedingungen, einschließlich medikamentöser Behandlungen und genetischer Veränderungen. Zu den Anwendungen gehören High-Content-Screening, Live-Cell-Imaging und andere fluoreszenzbasierte Techniken, die wertvolle Einblicke in den nukleozytoplasmatischen Transport und die Integrität der Kernhülle bieten.

Gewebe
Endozervix
Krankheit
Adenokarzinom
Metastasenherd
Nicht zutreffend (HeLa-Kyoto-Derivat; Primärtumor befindet sich im Endozervix)
Anwendungen
Biologie des Kernporenkomplexes (NPC); nukleozytoplasmatischer Transport; Dynamik und Funktion von Nup188; Fluoreszenzbildgebung der Kernhülle in lebenden Zellen; High-Content-Screening; Validierungsstudien zu CRISPR-Knock-in; Bewertung von Kerntransportinhibitoren

02Klassifizierung

Organismus
Mensch
Sex
Weiblich
Wachstumseigenschaften
Anhänger
GVO-Status
GMO-S1
Angaben zum GVO-Status
GMO-S1: This HeLa Kyoto line contains a CRISPR knock-in of mEGFP at the Nup188 locus, enabling visualization of nuclear pore scaffold dynamics. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Biologische Sicherheitsstufe
1

03Merkmale

Morphologie
Epithelähnliche Zellen mit mosaikartiger Steinform
Zelltyp
Epithelzellen

04Bezeichner

Quellenangabe
HK-CRISPR-Nup188-mEGFP (Cytion-Katalognummer 300657)
NCBI-Steuer-ID
9606
Einleger
Das Ellenberg-Labor (EMBL)

05Expression und Anfälligkeit

Proteinexpression
Nup188, mEGFP-Tag

06Handhabung und Kultur

Nährmedium
DMEM, w: 4,5 g/L Glucose, w: 4 mM L-Glutamin, w: 3,7 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM Natriumpyruvat (Cytion-Artikelnummer 820300a)
Inkubationsatmosphäre

37°C, 5%CO2, befeuchtete Atmosphäre.

Nahrungsergänzungsmittel
Ergänzen Sie das Medium mit 10% FBS
Dissoziationsreagenz
Accutase
Subkultivierung
Entfernen Sie das alte Medium von den adhärenten Zellen und waschen Sie sie mit PBS, das kein Kalzium und Magnesium enthält. Für T25-Kolben 3-5 ml PBS und für T75-Kolben 5-10 ml verwenden. Anschließend werden die Zellen vollständig mit Accutase bedeckt, wobei 1-2 ml für T25-Kolben und 2,5 ml für T75-Kolben verwendet werden. Lassen Sie die Zellen 8-10 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren, um sie abzulösen. Nach der Inkubation mischen Sie die Zellen vorsichtig mit 10 ml Medium, um sie zu resuspendieren, und zentrifugieren sie dann 3 Minuten lang bei 300xg. Den Überstand verwerfen, die Zellen in frischem Medium resuspendieren und in neue Kolben überführen, die bereits frisches Medium enthalten.
Auftauen und Kultivierung
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Qualitätskontrolle und Kryokonservierung

Sterilität

Eine Kontamination mit Mykoplasmen wird sowohl durch PCR-basierte Assays als auch durch lumineszenzbasierte Mykoplasmen-Nachweisverfahren ausgeschlossen.

Um sicherzustellen, dass keine Kontamination mit Bakterien, Pilzen oder Hefen vorliegt, werden die Zellkulturen täglich visuell überprüft.

Gefriermedium
Als Kryokonservierungsmedium verwenden wir komplettes Wachstumsmedium (einschließlich FBS) + 10 % DMSO für eine angemessene Lebensfähigkeit nach dem Auftauen oder CM-1 (Cytion Katalognummer 800100), das optimierte Osmoprotektoren und Stoffwechselstabilisatoren enthält, um die Erholung zu verbessern und kryoinduzierten Stress zu reduzieren.
Lagerbedingungen

Zur Langzeitkonservierung werden die Fläschchen in flüssigem Stickstoff bei etwa -150 bis -196 °C gelagert. Eine Lagerung bei -80 °C ist nur als kurzer Zwischenschritt vor der Überführung in flüssigen Stickstoff akzeptabel.

Versandbedingungen

Kryokonservierte Zelllinien werden auf Trockeneis in einer validierten, isolierten Verpackung mit ausreichend Kühlmittel versandt, um während des gesamten Transports eine Temperatur von etwa -78 °C aufrechtzuerhalten. Prüfen Sie den Behälter bei Erhalt sofort und bringen Sie die Fläschchen unverzüglich in ein geeignetes Lager.

08Spender

Alter des Spenders
30 Jahre
Ethnische Zugehörigkeit
Afroamerikaner