Gå direkt till innehållet
HK-CRISPR-Nup188-mEGFP
Vävnad
Endocervix
Sjukdom
Adenocarcinom
Metastaseringsställe
Ej tillämpligt (HeLa-derivat från Kyoto; primärtumören är belägen i livmoderhalsens inre del)

HK-CRISPR-Nup188-mEGFP

Cell line · Produktnummer 300657

HK-CRISPR-Nup188-mEGFP is a genetically modified Hela Kyoto cell line. It uses CRISPR/Cas9 technology to integrate mEGFP (monomeric Enhanced Green Fluores...

€800.00exkl. moms och frakt

Anpassning / Rekommendationer

Finns i lager
Lot
Rekommenderat (det färskaste partiet)
  • CoA
1

01Allmän information

Beskrivning

HK-CRISPR-Nup188-mEGFP är en genetiskt modifierad Hela Kyoto-cellinje. Den använder CRISPR/Cas9-teknik för att integrera mEGFP (monomeric Enhanced Green Fluorescent Protein) i Nup188-locus. Nup188 är ett viktigt nukleoporinprotein som ingår i kärnporskomplexet, vilket är nödvändigt för molekyltransporten mellan kärnan och cytoplasman. Märkningen med mEGFP möjliggör visualisering av Nup188 i realtid, vilket underlättar studier av kärnporskomplexets dynamik och funktion.

Denna cellinje är särskilt användbar för forskare som fokuserar på kärntransport och kärnporkomplexets biologi. Dess fluorescerande märkning möjliggör observation av Nup188 under olika förhållanden, inklusive läkemedelsbehandlingar och genetiska modifieringar. Tillämpningarna omfattar höginnehållsscreening, avbildning av levande celler och andra fluorescensbaserade tekniker, vilket ger värdefulla insikter i nukleocytoplasmisk transport och kärnhöljets integritet.

Vävnad
Endocervix
Sjukdom
Adenocarcinom
Metastaseringsställe
Ej tillämpligt (HeLa-derivat från Kyoto; primärtumören är belägen i livmoderhalsens inre del)
Ansökningar
Biologi kring kärnporkomplexet (NPC); transport mellan kärna och cytoplasma; Nup188:s dynamik och funktion; fluorescensavbildning av kärnmembranet i levande celler; high-content-screening; valideringsstudier av CRISPR-knock-in; utvärdering av hämmare av kärntransport

02Klassificering

Organism
Människa
Kön
Kvinna
Tillväxtegenskaper
Följsam
GMO-status
GMO-S1
Detaljer om GMO-status
GMO-S1: This HeLa Kyoto line contains a CRISPR knock-in of mEGFP at the Nup188 locus, enabling visualization of nuclear pore scaffold dynamics. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Biosäkerhetsnivå
1

03Egenskaper

Morfologi
Epitelliknande celler med mosaikstensform
Celltyp
Epiteliala celler

04Identifierare

Källa
HK-CRISPR-Nup188-mEGFP (Cytion katalognummer 300657)
NCBI-skattenummer
9606
Insättare
Ellenberg-laboratoriet (EMBL)

05Uttryck och mottaglighet

Proteinexpression
Nup188, mEGFP-tagg

06Hantering och odling

Odlingsmedium
DMEM, w: 4,5 g/L glukos, w: 4 mM L-glutamin, w: 3,7 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM natriumpyruvat (Cytion artikelnummer 820300a)
Inkubationsatmosfär

37°C, 5%CO2, befuktad atmosfär.

Kosttillskott
Komplettera mediet med 10% FBS
Dissociationsmedel
Accutase
Vidareodling
Ta bort det gamla mediet från de adherenta cellerna och tvätta dem med PBS som saknar kalcium och magnesium. Använd 3-5 ml PBS för T25-kolvar och 5-10 ml för T75-kolvar. Täck sedan cellerna helt med Accutase, använd 1-2 ml för T25-kolvar och 2,5 ml för T75-kolvar. Låt cellerna inkubera i rumstemperatur i 8-10 minuter så att de lossnar. Efter inkubationen, blanda cellerna försiktigt med 10 ml medium för att resuspendera dem och centrifugera sedan vid 300xg i 3 minuter. Kassera supernatanten, resuspendera cellerna i färskt medium och överför dem till nya kolvar som redan innehåller färskt medium.
Upptining och odling
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kvalitetskontroll och kryokonservering

Sterilitet

Mykoplasmakontaminering utesluts med hjälp av både PCR-baserade analyser och luminiscensbaserade metoder för mykoplasmadiagnostik.

För att säkerställa att det inte finns någon kontaminering av bakterier, svamp eller jäst utsätts cellkulturerna för dagliga visuella inspektioner.

Frysmedel
Som kryokonserveringsmedium använder vi komplett tillväxtmedium (inklusive FBS) + 10% DMSO för adekvat viabilitet efter upptining, eller CM-1 (Cytion katalognummer 800100), som innehåller optimerade osmoprotektanter och metaboliska stabilisatorer för att förbättra återhämtningen och minska kryoinducerad stress.
Förvaringsförhållanden

För långtidsförvaring, placera flaskorna i flytande kväve i ångfas vid ca -150 till -196 °C. Förvaring vid -80 °C är acceptabelt endast som ett kort mellanliggande steg innan överföring till flytande kväve.

Leveransvillkor

Kryopreserverade cellinjer skickas på torris i validerade, isolerade förpackningar med tillräckligt med kylmedel för att hålla cirka -78 °C under hela transporten. Vid mottagandet ska behållaren omedelbart inspekteras och flaskorna utan dröjsmål överföras till lämplig förvaring.

08Donator

Donatorns ålder
30 år
Etnicitet
Afroamerikan