.jpg)
- Vävnad
- Endocervix
- Sjukdom
- Adenocarcinom
- Metastaseringsställe
- Ej tillämpligt (HeLa-derivat från Kyoto; primärtumören är belägen i livmoderhalsens inre del)
Dokument
HK-CRISPR-Nup188-mEGFP
Cell line · Produktnummer 300657
HK-CRISPR-Nup188-mEGFP is a genetically modified Hela Kyoto cell line. It uses CRISPR/Cas9 technology to integrate mEGFP (monomeric Enhanced Green Fluores...
Anpassning / Rekommendationer
- HK-CRISPR-Nup188-mEGFPCell line€800.00
Rekommenderat (det färskaste partiet)
01Allmän information
- Beskrivning
HK-CRISPR-Nup188-mEGFP är en genetiskt modifierad Hela Kyoto-cellinje. Den använder CRISPR/Cas9-teknik för att integrera mEGFP (monomeric Enhanced Green Fluorescent Protein) i Nup188-locus. Nup188 är ett viktigt nukleoporinprotein som ingår i kärnporskomplexet, vilket är nödvändigt för molekyltransporten mellan kärnan och cytoplasman. Märkningen med mEGFP möjliggör visualisering av Nup188 i realtid, vilket underlättar studier av kärnporskomplexets dynamik och funktion.
Denna cellinje är särskilt användbar för forskare som fokuserar på kärntransport och kärnporkomplexets biologi. Dess fluorescerande märkning möjliggör observation av Nup188 under olika förhållanden, inklusive läkemedelsbehandlingar och genetiska modifieringar. Tillämpningarna omfattar höginnehållsscreening, avbildning av levande celler och andra fluorescensbaserade tekniker, vilket ger värdefulla insikter i nukleocytoplasmisk transport och kärnhöljets integritet.
- Vävnad
- Endocervix
- Sjukdom
- Adenocarcinom
- Metastaseringsställe
- Ej tillämpligt (HeLa-derivat från Kyoto; primärtumören är belägen i livmoderhalsens inre del)
- Ansökningar
- Biologi kring kärnporkomplexet (NPC); transport mellan kärna och cytoplasma; Nup188:s dynamik och funktion; fluorescensavbildning av kärnmembranet i levande celler; high-content-screening; valideringsstudier av CRISPR-knock-in; utvärdering av hämmare av kärntransport
02Klassificering
- Organism
- Människa
- Kön
- Kvinna
- Tillväxtegenskaper
- Följsam
- GMO-status
- GMO-S1
- Detaljer om GMO-status
- GMO-S1: This HeLa Kyoto line contains a CRISPR knock-in of mEGFP at the Nup188 locus, enabling visualization of nuclear pore scaffold dynamics. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
- Biosäkerhetsnivå
- 1
03Egenskaper
- Morfologi
- Epitelliknande celler med mosaikstensform
- Celltyp
- Epiteliala celler
04Identifierare
- Källa
- HK-CRISPR-Nup188-mEGFP (Cytion katalognummer 300657)
- NCBI-skattenummer
- 9606
- Insättare
- Ellenberg-laboratoriet (EMBL)
05Uttryck och mottaglighet
- Proteinexpression
- Nup188, mEGFP-tagg
06Hantering och odling
- Odlingsmedium
- DMEM, w: 4,5 g/L glukos, w: 4 mM L-glutamin, w: 3,7 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM natriumpyruvat (Cytion artikelnummer 820300a)
- Inkubationsatmosfär
37°C, 5%CO2, befuktad atmosfär.
- Kosttillskott
- Komplettera mediet med 10% FBS
- Dissociationsmedel
- Accutase
- Vidareodling
- Ta bort det gamla mediet från de adherenta cellerna och tvätta dem med PBS som saknar kalcium och magnesium. Använd 3-5 ml PBS för T25-kolvar och 5-10 ml för T75-kolvar. Täck sedan cellerna helt med Accutase, använd 1-2 ml för T25-kolvar och 2,5 ml för T75-kolvar. Låt cellerna inkubera i rumstemperatur i 8-10 minuter så att de lossnar. Efter inkubationen, blanda cellerna försiktigt med 10 ml medium för att resuspendera dem och centrifugera sedan vid 300xg i 3 minuter. Kassera supernatanten, resuspendera cellerna i färskt medium och överför dem till nya kolvar som redan innehåller färskt medium.
- Upptining och odling
Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.
Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.
For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.
Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.
Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.
Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.
Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.
Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.
07Kvalitetskontroll och kryokonservering
- Sterilitet
Mykoplasmakontaminering utesluts med hjälp av både PCR-baserade analyser och luminiscensbaserade metoder för mykoplasmadiagnostik.
För att säkerställa att det inte finns någon kontaminering av bakterier, svamp eller jäst utsätts cellkulturerna för dagliga visuella inspektioner.
- Frysmedel
- Som kryokonserveringsmedium använder vi komplett tillväxtmedium (inklusive FBS) + 10% DMSO för adekvat viabilitet efter upptining, eller CM-1 (Cytion katalognummer 800100), som innehåller optimerade osmoprotektanter och metaboliska stabilisatorer för att förbättra återhämtningen och minska kryoinducerad stress.
- Förvaringsförhållanden
För långtidsförvaring, placera flaskorna i flytande kväve i ångfas vid ca -150 till -196 °C. Förvaring vid -80 °C är acceptabelt endast som ett kort mellanliggande steg innan överföring till flytande kväve.
- Leveransvillkor
Kryopreserverade cellinjer skickas på torris i validerade, isolerade förpackningar med tillräckligt med kylmedel för att hålla cirka -78 °C under hela transporten. Vid mottagandet ska behållaren omedelbart inspekteras och flaskorna utan dröjsmål överföras till lämplig förvaring.
08Donator
- Donatorns ålder
- 30 år
- Etnicitet
- Afroamerikan
09Juridiska frågor och säkerhet
- Säkerhetsföreskrifter
- När man planerar att förvara en kryovial i flytande kväve för framtida upptining är det obligatoriskt att följa strikta säkerhetsåtgärder. Lämpliga skyddshandskar och skyddskläder är nödvändiga, och ansiktsmask eller skyddsglasögon måste användas vid överföring av frysta prover till eller från tanken med flytande kväve. Detta för att minska risken för skador på grund av eventuella explosioner i frysbehållaren vid borttagning, vilket kan leda till att vassa fragment projiceras.
- Garanti
På Cytion står vi bakom våra produkters kvalitet och livskraft. Vi garanterar att våra celler är livsdugliga vid odlingens början i 60 dagar efter leverans från våra anläggningar. Vi försäkrar att allt material överensstämmer med de specifikationer som beskrivs i analyscertifikatet och/eller produktbladet
För fullständig information, se vår <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garantiförklaring
- Avtal med tredje part gäller
- Ja