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PtK2
Tessuto
Rene
Sinonimi
Pt K2 (NBL-5), NBL-5, Pt-K2, PTK-2, Ptk-2, PTK 2, PtK 2, PTK2, Pt K2, Ptk2, Potorous tridactylus Kidney 2

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PtK2

Cell line · Codice prodotto 608316

PtK2 cells are an epithelial cell line derived from the kidney of a male long-nosed potoroo, Potorous tridactylis, a marsupial species. These cells are we...

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01Informazioni generali

Descrizione

Le cellule PtK2 sono una linea cellulare epiteliale derivata dal rene di un potoroo maschio dal naso lungo, Potorous tridactylis, una specie marsupiale. Queste cellule sono note per le loro grandi dimensioni e il numero ridotto di cromosomi (2n = 12), che le rendono particolarmente utili negli studi citogenetici. Grazie alla facilità di visualizzazione dei cromosomi, le cellule PtK2 costituiscono un modello eccellente per lo studio della mitosi, del movimento dei cromosomi e degli aspetti strutturali della divisione cellulare. Inoltre, mantengono una morfologia piatta durante tutto il ciclo cellulare, anche durante la mitosi, il che facilita l'osservazione dei processi cellulari al microscopio.

Le cellule PtK2 presentano modelli specifici di suscettibilità ai virus, essendo resistenti all'adenovirus 5, al coxsackievirus B5 e al poliovirus 2, mentre sono suscettibili al coxsackievirus A9, all'herpes simplex, alla vaccinia e ai virus della stomatite vescicolare. Inoltre, queste cellule possiedono filamenti intermedi composti da cheratina, che contribuiscono alla loro integrità strutturale. Nella ricerca biomedica, le cellule PtK2 sono spesso utilizzate per studiare la divisione cellulare, le interazioni virus-ospite e l'organizzazione citoscheletrica.

Tessuto
Rene
Sinonimi
  • Pt K2 (NBL-5)
  • NBL-5
  • Pt-K2
  • PTK-2
  • Ptk-2
  • PTK 2
  • PtK 2
  • PTK2
  • Pt K2
  • Ptk2
  • Potorous tridactylus Kidney 2

02Classificazione

Organismo
Potoroo
Sesso
Maschio
Proprietà di crescita
Aderente
Livello di biosicurezza
1

03Caratteristiche

Morfologia
Simile all'epitelio

04Identificatori

Riferimento bibliografico
PtK2 (numero di catalogo Cytion 608316)
Codice fiscale NCBI
9310
Cellosaurus
CVCL_0514

05Espressione e suscettibilità

Suscettibilità ai virus
Coxsackievirus A9, herpes simplex, vaccinia, stomatite vescicolare (Ogden)
Resistenza ai virus
Adenovirus 5, coxsackievirus B5, poliovirus 2
Trascriptasi inversa
Negativo
Prodotti
Cheratina

06Manipolazione e coltura

Terreno di coltura
RPMI 1640, w: 2,0 mM di glutammina stabile, w: 2,0 g/L di NaHCO3 (articolo Cytion numero 820700a)
Atmosfera di incubazione

37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.

Integratori
Integrare il terreno di coltura con il 15% di FBS
Reagente di dissociazione
Accutase
Subcoltura
Rimuovere il vecchio terreno dalle cellule aderenti e lavarle con PBS privo di calcio e magnesio. Per le fiasche T25, utilizzare 3-5 ml di PBS e per le fiasche T75, 5-10 ml. Quindi, coprire completamente le cellule con Accutase, utilizzando 1-2 ml per le fiasche T25 e 2,5 ml per le fiasche T75. Lasciare incubare le cellule a temperatura ambiente per 8-10 minuti per staccarle. Dopo l'incubazione, mescolare delicatamente le cellule con 10 ml di terreno per risospenderle, quindi centrifugare a 300xg per 3 minuti. Scartare il surnatante, risospendere le cellule in terreno fresco e trasferirle in nuove fiasche contenenti terreno fresco.
Densità di semina
1 x 104 cellule/cm2
Recupero post-scongelamento
Dopo lo scongelamento, piastrare le cellule a 5 x 104 cellule/cm2 e lasciare che le cellule si riprendano dal processo di congelamento e aderiscano per almeno 24 ore.
Scongelamento e coltura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Controllo di qualità e crioconservazione

Sterilità

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo un terreno di crescita completo (incluso FBS) + 10% DMSO per un'adeguata vitalità post-scongelamento, o CM-1 (numero di catalogo Cytion 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crio-indotto.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

08Donatore

Età dei donatori
Adulti