Премини към съдържанието
HK-2xZFN-mEGFP-Nup107
Тъкан
Ендоцервикс
Заболяване
Аденокарцином
Място на метастазите
Място на първичния тумор (ендоцервикс)

Документи

HK-2xZFN-mEGFP-Nup107

Cell line · Номер на продукта 300676

Клетъчната линия HK-2xZFN-mEGFP-Nup107 е генетично модифициран вариант на клетъчната линия Hela Kyoto, получена от клетки на рак на шийката на матката при човека. Тази клетъчна линия...

€800.00без ДДС и доставка

Персонализиране / Препоръки

Наличността е ниска
Лот
Препоръчани (най-новата партида)
1

01Обща информация

Описание

Клетъчната линия HK-2xZFN-mEGFP-Nup107 е генетично модифициран вариант на клетъчната линия Hela Kyoto, получена от човешки клетки на рак на маточната шийка. Тази клетъчна линия е модифицирана с помощта на технологията ZFN (Zinc Finger Nuclease), за да се интегрира мономерен подобрен зеленофлуоресцентен протеин (mEGFP) в гена Nup107, който е ключов компонент на комплекса на ядрената пора (NPC). Nup107 играе ключова роля в нуклеоцитоплазмения транспорт, който е от съществено значение за клетъчната хомеостаза и генната регулация.

Интеграцията на mEGFP позволява визуализиране и проследяване на Nup107, което улеснява изследванията на динамиката и функциите на NPC. Това флуоресцентно маркиране помага да се разбере пространственото и времевото разпределение на Nup107 и взаимодействията му с други нуклеопорини и транспортни фактори. Клетъчната линия HK-2xZFN-mEGFP-Nup107 е безценна за изследване на механизмите на клетъчния транспорт и патофизиологията на заболяванията.

Тази клетъчна линия предоставя надежден модел за изучаване на сложната работа на NPC и последиците от нея за здравето и болестите, като съчетава генетичната стабилност и човешкия произход на клетките Hela Kyoto с усъвършенствано генно инженерство.

Тъкан
Ендоцервикс
Заболяване
Аденокарцином
Място на метастазите
Място на първичния тумор (ендоцервикс)
Приложения
Биология на ядрения порен комплекс (NPC); визуализация на Nup107/Y-комплекса; ядро-цитоплазмен транспорт; визуализация на живи клетки с mEGFP; динамика на NPC; валидиране на редактирането на генома с ZFN

02Класификация

Организъм
Човек
Секс
Женски
Свойства, свързани с растежа
Привърженик
Статус на ГМО
GMO-S1
Подробности относно статуса на ГМО
GMO-S1: This HeLa Kyoto line contains a ZFN-integrated mEGFP fusion at the Nup107 locus enabling nuclear pore complex imaging. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Ниво на биологична безопасност
1

03Характеристики

Морфология
Епителиални клетки с форма на мозаечно камъче
Тип клетка
Епителни клетки

04Идентификатори

Източник
HK-2xZFN-mEGFP-Nup107 (каталожен номер 300676 на Cytion)
Данъчен идентификационен номер в NCBI
9606
Целозавър
CVCL_VL12
Вложител
Лабораторията на Елънбърг (EMBL)

05Проява и предразположеност

Продукти
EGFP (подобрен зелен флуоресцентен протеин) Nup107

06Обработка и отглеждане

Хранителна среда
DMEM, w: 4,5 g/L глюкоза, w: 4 mM L-глутамин, w: 3,7 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM натриев пируват (номер на изделието на Cytion 820300a)
Атмосфера за инкубация

37°C, 5%CO2, овлажнена атмосфера.

Добавки
Допълнете средата с 10% FBS
Реагент за дисоциация
Accutase
Пресаждане
Отстранете старата среда от адхезивните клетки и ги промийте с PBS, която не съдържа калций и магнезий. За колби Т25 използвайте 3-5 ml PBS, а за колби Т75 - 5-10 ml. След това покрийте клетките изцяло с Accutase, като използвате 1-2 ml за колби Т25 и 2,5 ml за колби Т75. Оставете клетките да се инкубират на стайна температура за 8-10 минути, за да се отделят. След инкубацията внимателно разбъркайте клетките с 10 ml среда, за да ги ресуспендирате, след което центрофугирайте при 300xg за 3 минути. Изхвърлете супернатантата, ресуспендирайте клетките в прясна среда и ги прехвърлете в нови колби, които вече съдържат прясна среда.
Обновяване на течността
2 до 3 пъти седмично
Размразяване и култивиране
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Контрол на качеството и криоконсервация

Стерилност

Замърсяването с микоплазма се изключва както чрез PCR-базирани анализи, така и чрез луминесцентни методи за откриване на микоплазма.

За да се гарантира, че няма бактериално, гъбично или дрождево замърсяване, клетъчните култури се подлагат на ежедневни визуални проверки.

Среда за замразяване
Като среда за криоконсервация използваме пълна среда за растеж (включително FBS) + 10% DMSO за адекватна жизнеспособност след размразяване или CM-1 (каталожен номер 800100 на Cytion), която включва оптимизирани осмопротектори и метаболитни стабилизатори за подобряване на възстановяването и намаляване на криоиндуцирания стрес.
Условия за съхранение

За дълготрайно съхранение поставете флаконите в течен азот в парна фаза при температура около -150 до -196 °C. Съхранението при -80 °C е приемливо само като кратък междинен етап преди прехвърлянето в течен азот.

Условия за доставка

Криоконсервираните клетъчни линии се транспортират върху сух лед в утвърдени, изолирани опаковки с достатъчно хладилен агент, за да се поддържа приблизително -78 °C по време на транспортирането. При получаването незабавно прегледайте опаковката и незабавно прехвърлете флаконите за подходящо съхранение.

08Дарител

Възраст на донора
30 години
Етническа принадлежност
Афроамериканец