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Daoy
Gewebe
Gehirn, Kleinhirn
Krankheit
Medulloblastom
Synonyme
DAOY, D324 Med, D-324 Med, D324 MED, D-324MED, D324

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Daoy

Cell line · Artikelnummer 305053

The Daoy cell line, established in 1985 by P.F. Jacobsen at the Royal Perth Hospital in Western Australia, is a human cell line derived from a medulloblas...

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01Allgemeine Informationen

Beschreibung

Die Daoy-Zelllinie, die 1985 von P.F. Jacobsen am Royal Perth Hospital in Westaustralien entwickelt wurde, ist eine menschliche Zelllinie, die von einem Medulloblastom stammt, einer Art von Hirntumor, der vorwiegend bei Kindern auftritt. Diese Zelllinie stammt aus der Biopsie eines Tumors in der hinteren Schädelgrube eines 4-jährigen Jungen. Medulloblastome sind in der Regel im Kleinhirn lokalisiert, einem Bereich des Gehirns, der für die motorische Kontrolle und Koordination entscheidend ist, und sind die häufigsten bösartigen Hirntumore bei Kindern.

Daoy-Zellen werden häufig als Modellsystem für die Untersuchung der Biologie des Medulloblastoms verwendet, einschließlich der Tumorentstehung, des Fortschreitens und des Ansprechens auf Therapien. Die Zelllinie hat in der Medulloblastom-Forschung eine wichtige Rolle gespielt, insbesondere beim Verständnis der molekularen und genetischen Grundlagen der Krankheit und bei der Prüfung von Chemotherapeutika. Die Zellen weisen typische Merkmale bösartiger Medulloblastome auf, darunter schnelle Wachstumsraten und die Fähigkeit zur Tumorbildung, wenn sie in immungeschwächte Mäuse transplantiert werden. Die Forschung mit der Daoy-Zelllinie hat zur Entwicklung potenzieller neuer Behandlungen und therapeutischer Ziele für Medulloblastome beigetragen.

Gewebe
Gehirn, Kleinhirn
Krankheit
Medulloblastom
Synonyme
  • DAOY
  • D324 Med
  • D-324 Med
  • D324 MED
  • D-324MED
  • D324

02Klassifizierung

Organismus
Mensch
Sex
Männlich
Wachstumseigenschaften
Anhänger
Biologische Sicherheitsstufe
1

03Merkmale

Morphologie
Polygonal
Verdopplungszeit
34 Stunden

04Bezeichner

Quellenangabe
Daoy (Cytion Katalognummer 305053)
NCBI-Steuer-ID
9606
Cellosaurus
CVCL_1167

05Handhabung und Kultur

Nährmedium
EMEM (MEM Eagle), w: 2 mM L-Glutamin, w: 2,2 g/L NaHCO3, w: EBSS (Cytion-Artikelnummer 820100a)
Inkubationsatmosphäre

37°C, 5%CO2, befeuchtete Atmosphäre.

Nahrungsergänzungsmittel
Ergänzen Sie das Medium mit 10% FBS und 1% NEAA
Dissoziationsreagenz
Accutase
Subkultivierung
Entfernen Sie das alte Medium von den adhärenten Zellen und waschen Sie sie mit PBS, das kein Kalzium und Magnesium enthält. Für T25-Kolben 3-5 ml PBS und für T75-Kolben 5-10 ml verwenden. Anschließend werden die Zellen vollständig mit Accutase bedeckt, wobei 1-2 ml für T25-Kolben und 2,5 ml für T75-Kolben verwendet werden. Lassen Sie die Zellen 8-10 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren, um sie abzulösen. Nach der Inkubation mischen Sie die Zellen vorsichtig mit 10 ml Medium, um sie zu resuspendieren, und zentrifugieren sie dann 3 Minuten lang bei 300xg. Den Überstand verwerfen, die Zellen in frischem Medium resuspendieren und in neue Kolben überführen, die bereits frisches Medium enthalten.
Flüssigkeitswechsel
2 bis 3 Mal pro Woche
Auftauen und Kultivierung
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Qualitätskontrolle und Kryokonservierung

Sterilität

Eine Kontamination mit Mykoplasmen wird sowohl durch PCR-basierte Assays als auch durch lumineszenzbasierte Mykoplasmen-Nachweisverfahren ausgeschlossen.

Um sicherzustellen, dass keine Kontamination mit Bakterien, Pilzen oder Hefen vorliegt, werden die Zellkulturen täglich visuell überprüft.

Gefriermedium
Als Kryokonservierungsmedium verwenden wir komplettes Wachstumsmedium (einschließlich FBS) + 10 % DMSO für eine angemessene Lebensfähigkeit nach dem Auftauen oder CM-1 (Cytion Katalognummer 800100), das optimierte Osmoprotektoren und Stoffwechselstabilisatoren enthält, um die Erholung zu verbessern und kryoinduzierten Stress zu reduzieren.
Lagerbedingungen

Zur Langzeitkonservierung werden die Fläschchen in flüssigem Stickstoff bei etwa -150 bis -196 °C gelagert. Eine Lagerung bei -80 °C ist nur als kurzer Zwischenschritt vor der Überführung in flüssigen Stickstoff akzeptabel.

Versandbedingungen

Kryokonservierte Zelllinien werden auf Trockeneis in einer validierten, isolierten Verpackung mit ausreichend Kühlmittel versandt, um während des gesamten Transports eine Temperatur von etwa -78 °C aufrechtzuerhalten. Prüfen Sie den Behälter bei Erhalt sofort und bringen Sie die Fläschchen unverzüglich in ein geeignetes Lager.

07Spender

Alter des Spenders
4 Jahre
Ethnische Zugehörigkeit
Europäisch