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Daoy
Tessuto
Cervello, cervelletto
Malattia
Medulloblastoma
Sinonimi
DAOY, D324 Med, D-324 Med, D324 MED, D-324MED, D324

Documenti

Daoy

Cell line · Codice prodotto 305053

The Daoy cell line, established in 1985 by P.F. Jacobsen at the Royal Perth Hospital in Western Australia, is a human cell line derived from a medulloblas...

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01Informazioni generali

Descrizione

La linea cellulare Daoy, creata nel 1985 da P.F. Jacobsen presso il Royal Perth Hospital dell'Australia occidentale, è una linea cellulare umana derivata da un medulloblastoma, un tipo di tumore cerebrale che si riscontra prevalentemente nei bambini. Questa linea cellulare ha avuto origine da una biopsia di un tumore della fossa posteriore di un bambino di 4 anni. I medulloblastomi sono tipicamente localizzati nel cervelletto, un'area del cervello cruciale per il controllo motorio e la coordinazione, e sono i tumori cerebrali maligni più comuni nei bambini.

Le cellule Daoy sono ampiamente utilizzate come sistema modello per studiare la biologia del medulloblastoma, compresi l'inizio, la progressione e la risposta alle terapie. Questa linea cellulare è stata fondamentale per la ricerca sul medulloblastoma, in particolare per la comprensione delle basi molecolari e genetiche della malattia e per la sperimentazione di agenti chemioterapici. Le cellule presentano le caratteristiche tipiche dei medulloblastomi maligni, tra cui una rapida crescita e la capacità di formare tumori quando vengono trapiantate in topi immunocompromessi. La ricerca condotta con la linea cellulare Daoy ha contribuito allo sviluppo di potenziali nuovi trattamenti e bersagli terapeutici per il medulloblastoma.

Tessuto
Cervello, cervelletto
Malattia
Medulloblastoma
Sinonimi
  • DAOY
  • D324 Med
  • D-324 Med
  • D324 MED
  • D-324MED
  • D324

02Classificazione

Organismo
Umano
Sesso
Maschio
Proprietà di crescita
Aderente
Livello di biosicurezza
1

03Caratteristiche

Morfologia
Poligonale
Tempo di raddoppio
34 ore

04Identificatori

Riferimento bibliografico
Daoy (numero di catalogo Cytion 305053)
Codice fiscale NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_1167

05Manipolazione e coltura

Terreno di coltura
EMEM (MEM Eagle), w: 2 mM L-Glutamina, w: 2,2 g/L NaHCO3, w: EBSS (articolo Cytion numero 820100a)
Atmosfera di incubazione

37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.

Integratori
Integrare il terreno di coltura con il 10% di FBS e l'1% di NEAA
Reagente di dissociazione
Accutase
Subcoltura
Rimuovere il vecchio terreno dalle cellule aderenti e lavarle con PBS privo di calcio e magnesio. Per le fiasche T25, utilizzare 3-5 ml di PBS e per le fiasche T75, 5-10 ml. Quindi, coprire completamente le cellule con Accutase, utilizzando 1-2 ml per le fiasche T25 e 2,5 ml per le fiasche T75. Lasciare incubare le cellule a temperatura ambiente per 8-10 minuti per staccarle. Dopo l'incubazione, mescolare delicatamente le cellule con 10 ml di terreno per risospenderle, quindi centrifugare a 300xg per 3 minuti. Scartare il surnatante, risospendere le cellule in terreno fresco e trasferirle in nuove fiasche contenenti terreno fresco.
Rinnovo dei fluidi
da 2 a 3 volte alla settimana
Scongelamento e coltura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Controllo di qualità e crioconservazione

Sterilità

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo un terreno di crescita completo (incluso FBS) + 10% DMSO per un'adeguata vitalità post-scongelamento, o CM-1 (numero di catalogo Cytion 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crio-indotto.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

07Donatore

Età dei donatori
4 anni
Etnia
Europeo