Pāriet uz saturu
Daoy
Audums
Smadzenes, smadzenītes
Slimība
Medulloblastoma
Sinonīmi
DAOY, D324 Med, D-324 Med, D324 MED, D-324MED, D324

Dokumenti

Daoy

Cell line · Preces numurs 305053

The Daoy cell line, established in 1985 by P.F. Jacobsen at the Royal Perth Hospital in Western Australia, is a human cell line derived from a medulloblas...

€430.00bez nodokļa un piegādes izmaksām
Noliktavā
Lot
Ieteicams (jaunākā partija)
  • CoA
1

01Vispārīga informācija

Apraksts

Daoy šūnu līnija, ko 1985. gadā izveidoja P. F. Jakobsens (P. F. Jacobsen) Karaliskajā Pērtas slimnīcā Rietumaustrālijā, ir cilvēka šūnu līnija, kas iegūta no medulloblastomas - smadzeņu audzēja veida, kas pārsvarā sastopams bērniem. Šī šūnu līnija tika iegūta no 4 gadus veca zēna aizmugurējās bedres audzēja biopsijas. Medulloblastomas parasti atrodas smadzenītēs - smadzeņu daļā, kas ir ļoti svarīga kustību kontrolei un koordinācijai, un tās ir visbiežāk sastopamie ļaundabīgie smadzeņu audzēji bērniem.

Daoy šūnas plaši izmanto kā modeļa sistēmu, lai pētītu medulloblastomas bioloģiju, tostarp audzēja rašanos, progresēšanu un reakciju uz terapiju. Šūnu līnija ir bijusi noderīga medulloblastomas pētniecībā, jo īpaši, lai izprastu slimības molekulāro un ģenētisko pamatu, kā arī ķīmijterapeitisko līdzekļu testēšanā. Šūnām piemīt ļaundabīgām medulloblastomām raksturīgas iezīmes, tostarp strauja augšanas ātrums un spēja veidot audzējus, ja tās transplantē imūnkompromitētām pelēm. Pētījumi, kuros izmantota Daoy šūnu līnija, ir veicinājuši potenciālu jaunu medulloblastomas ārstēšanas līdzekļu un terapeitisko mērķu izstrādi.

Audums
Smadzenes, smadzenītes
Slimība
Medulloblastoma
Sinonīmi
  • DAOY
  • D324 Med
  • D-324 Med
  • D324 MED
  • D-324MED
  • D324

02Klasifikācija

Organisms
Cilvēks
Sekss
Vīrietis
Augšanas īpašības
Atbalstītājs
Bioloģiskās drošības līmenis
1

03Raksturlielumi

Morfoloģija
Daudzstūris
Laiks, kas nepieciešams, lai skaits dubultojās
34 stundas

04Identifikatori

Atsauce
Daoy (Cytion kataloga numurs 305053)
NCBI nodokļu identifikācijas numurs
9606
Cellosaurus
CVCL_1167

05Apstrāde un audzēšana

Barotne
EMEM (MEM Eagle), w: 2 mM L-glutamīns, w: 2,2 g/L NaHCO3, w: EBSS (Cytion izstrādājuma numurs 820100a)
Inkubācijas vide

37°C, 5%CO2, mitrināta atmosfēra.

Papildinājumi
Papildināt barotni ar 10% FBS un 1% NEAA
Disociācijas reaģents
Accutase
Pārstādīšana
Noņemt veco barotni no pielipušajām šūnām un mazgāt tās ar PBS, kurā nav kalcija un magnija. T25 kolbām izmantojiet 3-5 ml PBS, bet T75 kolbām - 5-10 ml. Pēc tam pilnībā pārklājiet šūnas ar Accutase, izmantojot 1-2 ml T25 kolbām un 2,5 ml T75 kolbām. Ļaujiet šūnām inkubēties istabas temperatūrā 8-10 minūtes, lai tās atdalītos. Pēc inkubācijas uzmanīgi samaisiet šūnas ar 10 ml barotnes, lai tās atkārtoti suspendētu, pēc tam centrifugējiet 3 minūtes ar 300xg. Izmetiet supernatantu, atkārtoti suspendējiet šūnas svaigā barotnē un pārvietojiet tās jaunās kolbās, kurās jau ir svaiga barotne.
Šķidruma atjaunošana
2 līdz 3 reizes nedēļā
Atkausēšana un kultivēšana
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

06Kvalitātes kontrole un kriokonservācija

Sterilitāte

Mikoplazmas piesārņojums tiek izslēgts, izmantojot gan uz PCR balstītus testus, gan uz luminiscenci balstītas mikoplazmas noteikšanas metodes.

Lai pārliecinātos, ka nav baktēriju, sēnīšu vai rauga piesārņojuma, šūnu kultūras katru dienu vizuāli pārbauda.

Saldēšanas barotne
Kā kriokonservēšanas barotni mēs izmantojam pilnvērtīgu augšanas barotni (ieskaitot FBS) + 10 % DMSO, lai nodrošinātu pietiekamu dzīvotspēju pēc atkausēšanas, vai CM-1 (Cytion kataloga numurs 800100), kas ietver optimizētus osmoprotektorus un metaboliskos stabilizatorus, lai uzlabotu atveseļošanos un samazinātu krioinducēto stresu.
Uzglabāšanas nosacījumi

Ilgstošai uzglabāšanai flakonus ievietojiet šķidrā slāpeklī ar tvaika fāzi aptuveni -150 līdz -196 °C temperatūrā. Uzglabāšana -80 °C temperatūrā ir pieļaujama tikai kā īss starpposms pirms pārvietošanas uz šķidro slāpekli.

Piegādes nosacījumi

Kriokonservētas šūnu līnijas tiek sūtītas uz sausā ledus apstiprinātā, izolētā iepakojumā ar pietiekamu dzesēšanas šķidruma daudzumu, lai visā transportēšanas laikā uzturētu aptuveni -78 °C temperatūru. Pēc saņemšanas nekavējoties pārbaudiet iepakojumu un nekavējoties pārvietojiet flakonus uz atbilstošu uzglabāšanas vietu.

07Ziedotājs

Donora vecums
4 gadi
Etniskā piederība
Eiropas