Siirry sisältöön
B-LCL-CDG4
Kudos
Perifeerinen veri
Sairaus
Synnynnäiset glykosylaatiohäiriöt

Asiakirjat

B-LCL-CDG4

Cell line · Tuotenumero 302015

B-LCL-CDG4 is an EBV-transformed B lymphocyte cell line derived from a young girl with CDAII. CDAII is a rare genetic anaemia, affiliated to the class of CDG...

€800.00ilman veroja ja toimituskuluja
Varastossa
Lot
Suositeltava (tuorein erä)
1

01Yleistä tietoa

Kuvaus
B-LCL-CDG4 on EBV-transformoitunut B-lymfosyyttisolulinja, joka on peräisin CDAII:ta sairastavalta nuorelta tytöltä. CDAII on harvinainen geneettinen anemia, joka kuuluu CDG-glykosylaatiohäiriöiden luokkaan. CDAII-potilailla on vika COPII-komponentin SEC23B-geenissä, joka osallistuu solunsisäiseen proteiinien kuljetusjärjestelmään (erityisesti vesikulaarinen nuppuuntuminen ER:stä). Kyseinen potilas on homotsygootti tämän geenin mutaation suhteen. Erytrosyyttikalvojen kaistan 3 glykoproteiini on aliglykosyloitunut glykoproteiinien polylaktosamiinimotiivien mutta ei glykosfingolipidien poikkeavalla glykosylaatiolla, joten CDA II -erytrosyyttien kaistalla 3 on typistyneitä hybridityyppisiä oligosakkarideja. Tämä viittaa lisävikaan Golgin glykosylaatioentsyymeissä mannosidaasi II:ssa tai nasetyyliglukosaminyylitransferaasi II:ssa.
Kudos
Perifeerinen veri
Sairaus
Synnynnäiset glykosylaatiohäiriöt
Sovellukset
CDG:n vaikutusten genotyypitys immuunisoluissa, toiminnallinen testaus (esim. B-solujen pinta-antigeenit), sytotoksisten lääkkeiden testaus, mutaatioanalyysi, apoptoottisten mekanismien analyysi, HLA-tyypitys, erilaisten solujen glykoproteiinien virheellisen glykosylaation vaikutus erilaisiin toimintoihin.

02Luokittelu

Organismi
Ihminen
Sukupuoli
Nainen
Kasvuominaisuudet
Jousitus
Bioturvallisuustaso
2

03Ominaisuudet

Morfologia
Pyöreät kennot
Solutyyppi
B-lymfosyytti

04Tunnisteet

Lähdeviite
B-LCL-CDG4 (Cytionin luettelonumero 302015)
NCBI-verotunnus
9606
Cellosaurus
CVCL_A9Y2

05Ilmentyminen ja alttius

Pinta-antigeenit
CD15 (Lewis x)+, CD15s (sialyloidut Lewis x)-, CD75s (sialyloidut laktosaminyyli-noligosakkaridit)+, CD173 (veriryhmä H)-, CD174 (veriryhmä Lewis y)-, CD175 (Tn)-, CD175s (sialyloidut Tn)-, CD176 (TF)+
Antigeenin ilmentyminen
CD19+, CD20+, CD37+, CD43+, CD44+, CD45+, CD45R0-, MHC-luokka I+, MHC-luokka II (HLA-DR)+
Virukset
Muuntaja: EBV

06Käsittely ja viljely

Viljelyalusta
RPMI 1640, w: 2,0 mM stabiilia glutamiinia, w: 2,0 g/L NaHCO3 (Cytionin artikkelinumero 820700a)
Inkubaatioilma

37 °C, 5 %CO2, kostutettu ilmakehä.

Ravintolisät
Täydennetään elatusainetta 10 % lämpöinaktivoidulla FBS:llä
Soluviljely
Ylläpidä viljelmät lisäämällä tai vaihtamalla kasvualusta säännöllisesti. Aloita viljelmät tiheydellä 2 x 105 solua/ml ja pidä solupitoisuus välillä 3 x 105 – 5 x 105 solua/ml optimaalisen kasvun saavuttamiseksi.
Nesteen uusiminen
Kun keskivärin väri muuttuu keltaiseksi
Sulamisen jälkeinen palautuminen
Medium
Sulatus ja viljely
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Laadunvalvonta ja kryosäilytys

Hedelmättömyys

Mykoplasmakontaminaatio suljetaan pois sekä PCR-pohjaisilla määrityksillä että luminesenssiin perustuvilla mykoplasman osoitusmenetelmillä.

Bakteeri-, sieni- tai hiivakontaminaation välttämiseksi soluviljelmät tarkastetaan päivittäin silmämääräisesti.

Jäädytysaine
Kryosäilytysmediana käytämme täydellistä kasvualustaa (mukaan lukien FBS) + 10 % DMSO:ta riittävän sulatuksen jälkeisen elinkelpoisuuden varmistamiseksi tai CM-1:tä (Cytionin luettelonumero 800100), joka sisältää optimoituja osmoprotectantteja ja metabolisia stabilisaattoreita, jotka parantavat elpymistä ja vähentävät kryosäilytyksen aiheuttamaa stressiä.
Säilytysolosuhteet

Pitkäaikaissäilytystä varten injektiopullot asetetaan höyryfaasissa olevaan nestemäiseen typpeen noin -150 - -196 °C:een. Säilytys -80 °C:ssa on hyväksyttävää vain lyhyenä välivaiheena ennen siirtoa nestemäiseen typpeen.

Toimitusehdot

Kryosäilytetyt solulinjat kuljetetaan kuivajäässä validoidussa, eristetyssä pakkauksessa, jossa on riittävästi kylmäainetta, jotta lämpötila pysyy noin -78 °C:ssa koko kuljetuksen ajan. Pakkaus on tarkastettava välittömästi sen vastaanottamisen jälkeen ja injektiopullot on siirrettävä viipymättä asianmukaiseen varastoon.

08Lahjoittaja

Luovuttajan ikä
Lapsi
Etnisyys
Kaukasialainen