Ir diretamente para o conteúdo
B-LCL-CDG4
Tecido
Sangue periférico
Doença
Perturbações congénitas da glicosilação

Documentos

B-LCL-CDG4

Cell line · Número do produto 302015

B-LCL-CDG4 is an EBV-transformed B lymphocyte cell line derived from a young girl with CDAII. CDAII is a rare genetic anaemia, affiliated to the class of CDG...

€800.00sem impostos nem portes de envio

Personalização / Recomendações

Em stock
Lote
Recomendado (lote mais recente)
1

01Informações gerais

Descrição
A B-LCL-CDG4 é uma linha celular de linfócitos B transformados pelo EBV, derivada de uma jovem rapariga com CDAII. A CDAII é uma anemia genética rara, pertencente à classe das doenças de glicosilação CDG. Os doentes com CDAII têm um defeito no gene SEC23B, componente do COPII, que está envolvido no sistema de transporte intracelular de proteínas (em particular, no brotamento vesicular do ER). O respetivo doente é homozigótico para a mutação neste gene. A glicoproteína da banda 3 das membranas dos eritrócitos é subglicosilada por glicosilação aberrante dos motivos de polilactosamina das glicoproteínas, mas não dos glicoesfingolípidos, pelo que a banda 3 dos eritrócitos CDA II tem oligossacáridos truncados de tipo híbrido. Este facto aponta para um defeito adicional nas enzimas de glicosilação do Golgi, a manosidase II ou a Nacetilglucosaminiltransferase II.
Tecido
Sangue periférico
Doença
Perturbações congénitas da glicosilação
Aplicações
Genotipagem dos efeitos das CDG nas células imunitárias, testes funcionais (por exemplo, antigénios de superfície das células B), testes de medicamentos citotóxicos, análise mutacional, análise dos mecanismos apoptóticos, tipagem HLA, impacto da glicosilação defeituosa de glicoproteínas celulares distintas em diversas funções.

02Classificação

Organismo
Humano
Sexo
Feminino
Propriedades de crescimento
Suspensão
Nível de biossegurança
2

03Características

Morfologia
Células redondas
Tipo de célula
Linfócito B

04Identificadores

Referência
B-LCL-CDG4 (número de catálogo Cytion 302015)
Número de identificação fiscal do NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_A9Y2

05Expressão e suscetibilidade

Antigénios de superfície
CD15 (Lewis x)+, CD15s (sialilado Lewis x)-, CD75s (sialilado lactosaminil Noligossacarídeos)+, CD173 (grupo sanguíneo H)-, CD174 (grupo sanguíneo Lewis y)-, CD175 (Tn)-, CD175s (sialilado Tn)-, CD176 (TF)+
Expressão do antígeno
CD19+, CD20+, CD37+, CD43+, CD44+, CD45+, CD45R0-, MHC Cl.I+, MHC Classe II (HLA-DR)+
Vírus
Transformante: EBV

06Manuseamento e cultura

Meio de cultura
RPMI 1640, com: 2,0 mM de glutamina estável, com: 2,0 g/L NaHCO3 (número de artigo Cytion 820700a)
Atmosfera de incubação

37°C, 5%CO2, atmosfera humidificada.

Suplementos
Completar o meio com 10% de FBS inactivado pelo calor
Subcultura
Mantenha as culturas adicionando ou substituindo periodicamente o meio. Inicie as culturas com uma densidade de 2 x 105 células/ml e mantenha a concentração celular dentro da faixa de 3 x 105 a 5 x 105 células/ml para um crescimento ideal.
Renovação de fluidos
Quando a cor média se torna amarela
Recuperação após o descongelamento
Médio
Descongelamento e cultura

  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Controlo de qualidade e criopreservação

Esterilidade

A contaminação por micoplasma é excluída utilizando ensaios baseados em PCR e métodos de deteção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não há contaminação bacteriana, fúngica ou de leveduras, as culturas de células são sujeitas a inspecções visuais diárias.

Meio de congelação
Como meio de criopreservação, utilizamos um meio de crescimento completo (incluindo FBS) + 10% DMSO para uma viabilidade pós-descongelamento adequada, ou CM-1 (número de catálogo Cytion 800100), que inclui osmoprotectores optimizados e estabilizadores metabólicos para melhorar a recuperação e reduzir o stress induzido pela crio.
Condições de armazenamento

Para conservação a longo prazo, colocar os frascos em azoto líquido em fase de vapor a uma temperatura entre -150 e -196 °C. O armazenamento a -80 °C é aceitável apenas como um curto passo intermédio antes da transferência para azoto líquido.

Condições de envio

As linhas celulares criopreservadas são expedidas em gelo seco em embalagens validadas e isoladas com refrigerante suficiente para manter aproximadamente -78 °C durante o transporte. Aquando da receção, inspecionar imediatamente o recipiente e transferir sem demora os frascos para um local de armazenamento adequado.

08Doador

Idade do dador
Criança
Etnia
Caucasiano