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B-LCL-CDG4
Tessuto
Sangue periferico
Malattia
Disturbi congeniti della glicosilazione

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B-LCL-CDG4

Cell line · Codice prodotto 302015

B-LCL-CDG4 is an EBV-transformed B lymphocyte cell line derived from a young girl with CDAII. CDAII is a rare genetic anaemia, affiliated to the class of CDG...

€800.00IVA e spese di spedizione escluse

Personalizzazione / Suggerimenti

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1

01Informazioni generali

Descrizione
B-LCL-CDG4 è una linea cellulare di linfociti B trasformati da EBV, derivata da una ragazza affetta da CDAII. La CDAII è una rara anemia genetica, appartenente alla classe dei disturbi della glicosilazione CDG. I pazienti affetti da CDAII presentano un difetto nel gene SEC23B, componente di COPII, coinvolto nel sistema di trasporto intracellulare delle proteine (in particolare la gemmazione vescicolare da ER). Il paziente in questione è omozigote per la mutazione di questo gene. La glicoproteina di banda 3 delle membrane degli eritrociti è sotto glicosilata a causa di una glicosilazione aberrante dei motivi polilattosaminici delle glicoproteine, ma non dei glicosfingolipidi; pertanto, la banda 3 degli eritrociti CDA II presenta oligosaccaridi troncati di tipo ibrido. Ciò indica un ulteriore difetto negli enzimi di glicosilazione del Golgi, la mannosidasi II o la nacetilglucosaminiltransferasi II.
Tessuto
Sangue periferico
Malattia
Disturbi congeniti della glicosilazione
Applicazioni
Genotipizzazione degli effetti delle CDG nelle cellule immunitarie, test funzionali (ad esempio, antigeni di superficie delle cellule B), test di farmaci citotossici, analisi mutazionale, analisi dei meccanismi apoptotici, tipizzazione HLA, impatto della glicosilazione difettosa di diverse glicoproteine cellulari su diverse funzioni.

02Classificazione

Organismo
Umano
Sesso
Donna
Proprietà di crescita
Sospensione
Livello di biosicurezza
2

03Caratteristiche

Morfologia
Celle rotonde
Tipo di cellula
Linfocita B

04Identificatori

Riferimento bibliografico
B-LCL-CDG4 (numero di catalogo Cytion 302015)
Codice fiscale NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_A9Y2

05Espressione e suscettibilità

Antigeni di superficie
CD15 (Lewis x)+, CD15s (Lewis x sialilato)-, CD75s (Noligoscaridi lactosaminici sialilati)+, CD173 (gruppo sanguigno H)-, CD174 (gruppo sanguigno Lewis y)-, CD175 (Tn)-, CD175s (Tn sialilato)-, CD176 (TF)+
Espressione dell'antigene
CD19+, CD20+, CD37+, CD43+, CD44+, CD45+, CD45R0-, MHC Cl.I+, MHC Classe II (HLA-DR)+
Virus
Trasformante: EBV

06Manipolazione e coltura

Terreno di coltura
RPMI 1640, w: 2,0 mM di glutammina stabile, w: 2,0 g/L di NaHCO3 (articolo Cytion numero 820700a)
Atmosfera di incubazione

37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.

Integratori
Integrare il terreno di coltura con il 10% di FBS inattivato termicamente
Subcoltura
Mantenere le colture aggiungendo o sostituendo periodicamente il terreno. Avviare le colture con una densità di 2 x 105 cellule/ml e mantenere la concentrazione cellulare compresa tra 3 x 105 e 5 x 105 cellule/ml per una crescita ottimale.
Rinnovo dei fluidi
Una volta che il colore medio è diventato giallo
Recupero post-scongelamento
Medio
Scongelamento e coltura

  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Controllo di qualità e crioconservazione

Sterilità

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo un terreno di crescita completo (incluso FBS) + 10% DMSO per un'adeguata vitalità post-scongelamento, o CM-1 (numero di catalogo Cytion 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crio-indotto.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

08Donatore

Età dei donatori
Bambino
Etnia
Caucasico