Tartalomra ugrás
HEK293-FAP
Szövet
Magzati vese
Betegség
Átalakított/halhatatlanná tett; nem tumorigenikus (HEK293 háttér)

Dokumentumok

HEK293-FAP

Cell line · Termékszám 305419

Jogi nyilatkozat: A sejtvonalak mellett feltüntetett árak kizárólag tudományos/non-profit ügyfelekre vonatkoznak. Kereskedelmi szervezetek esetében az árak...

€1,900.00adó és szállítási költség nélkül

Személyre szabás / Ajánlások

Rendelésre készül
1

01Általános információk

Leírás

Jogi nyilatkozat: A sejtvonalak mellett feltüntetett árak kizárólag tudományos/non-profit ügyfelekre vonatkoznak. Kereskedelmi szervezetek esetében az ár körülbelül 6 250 euró.
Ha kereskedelmi szervezetet képvisel, vagy nem biztos abban, hogy melyik kategória vonatkozik Önre, kérjük, vegye fel velünk a kapcsolatot.


A HEK293-FAP sejtvonal egy stabil, rekombináns HEK293 sejtvonal, amelyet úgy alakítottak ki, hogy magas szinten, sejtenként körülbelül 123 000 molekulával fejezze ki a fibroblaszt-aktiváló fehérjét (FAP). Ezt a sejtvonalat az inscreenex landing pad technológiájával fejlesztették ki, amely biztosítja a FAP gén pontos és reprodukálható integrációját egy specifikus, előzetesen validált genomikus lókuszba. A FAP, más néven Seprase vagy DPPIV, egy szerin proteáz, amely részt vesz az extracelluláris mátrix átalakításában, ami különösen fontos olyan folyamatokban, mint a sebgyógyulás, a szövethelyreállítás és a fibrózis. A FAP expressziója számos epiteliális rák sztrómájában is jelentősen fel van szabályozva, ami értékes célponttá teszi az onkológiai kutatás számára, és potenciális biomarkerként szolgálhat a rákkal társult fibroblasztok esetében.

A FAP expresszióját ebben a sejtvonalban áramlási citometriával, célspecifikus antitest segítségével igazolták, biztosítva ezzel a sejtpopulációban az egyenletes és megbízható receptor-sűrűséget.

Szövet
Magzati vese
Betegség
Átalakított/halhatatlanná tett; nem tumorigenikus (HEK293 háttér)
Alkalmazások
FAP-ellenes antitestek és immunterápiák fejlesztése; a tumor sztróma biológiája; a rákkal társult fibroblasztok (CAF) kutatása; ADC-k és bispecifikus antitestek fejlesztése; onkológiai szűrés

02Osztályozás

Organizmus
Ember
Szex
Nő
Növekedési tulajdonságok
Hűséges
GMO-státusz
GMO-S1
A GMO-státuszra vonatkozó részletek
GMO-S1: This HEK293 derivative contains a fibroblast activation protein (FAP) expression construct for receptor-function studies. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Biológiai biztonsági szint
1

03Jellemzők

Morfológia
Epithelszerű
Sejttípus
Epithel sejtek
Kettőzési idő
kb. 24–36 óra

04Azonosítók

Hivatkozás
HEK293-FAP (Cytion katalógusszám: 305419)
NCBI adóazonosító szám
9606
Cellosaurus
CVCL_6G23

05Kifejeződés és fogékonyság

Kifejeződő receptorok
FAP (Seprase vagy DPPIV)

06Kezelés és tenyésztés

Táptalaj
RPMI 1640, w: 2,0 mM stabil glutamin, w: 2,0 g/L NaHCO3 (Cytion 820700a cikkszám)
Inkubációs környezet

37°C, 5%CO2, párásított légkör.

Kiegészítők
A táptalajt egészítsük ki 10% FBS-szel, 1 mM nátrium-piruváttal, 10 mM HEPES-szel, 1% NEAA-val. Adjunk hozzá Geneticint (G418-Sulfat), hogy a végső koncentráció 1 mg/ml legyen.
Diszociációs reagens
Trypsin-EDTA
Átültetés
Rutinszerű adherens sejtkultúrához: Szívja le a régi táptalajt az adherens sejtekről, és mossa le őket PBS-szel a maradék táptalaj eltávolítása érdekében. A PBS leszívása után adjunk hozzá a tenyésztőedény méretének megfelelő mennyiségű tripszin/EDTA-oldatot (pl. 1 ml T25 lombikhoz, 3 ml T75 lombikhoz), és inkubáljuk szobahőmérsékleten vagy 37°C-on, amíg a sejtek leválnak (5-10 perc). Ellenőrizzük a leválást mikroszkóp alatt, és ha szükséges, óvatosan kopogtassuk meg az edényt a sejtek kiszabadításához. Ha a sejtek leváltak, adjunk hozzá teljes tápfolyadékot a tripszin/EDTA inaktiválásához, óvatosan szuszpendáljuk újra a sejteket, és a sejtszuszpenzió egy aliquotáját helyezzük át egy új, friss tápfolyadékot tartalmazó tenyésztőedénybe. Helyezze az edényt 37 °C-ra és 5%CO2-ra beállított inkubátorba, és 2-3 naponta cserélje a tápfolyadékot.
Osztási arány
1–5
Ültetési sűrűség
2–4 x 104 sejt/cm2
Folyadékcsere
hetente 2-3 alkalommal
Az olvadás utáni helyreállás

A felolvasztás után osszuk a sejteket 1:2-1:3 arányban T25 lombikokba, és hagyjuk, hogy a sejtek legalább 24 órán keresztül regenerálódjanak a fagyasztásból és megtapadjanak.

A sejtek felolvasztása után a legjobb kötődés és életképesség érdekében javasoljuk, hogy a mélyhűtés utáni első beültetéshez kollagénnel bevont lombikokat vagy lemezeket használjunk. A sejtek későbbi rutinszerű tenyésztéséhez nincs szükség kollagénbevonatra.

Felolvasztás és tenyésztés
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Minőségellenőrzés és kriokonzerválás

Meddőség

A mikoplazma-szennyeződést mind a PCR-alapú vizsgálatokkal, mind a lumineszcencia-alapú mikoplazma-kimutatási módszerekkel kizárják.

A bakteriális, gombás vagy élesztőgombás szennyeződés elkerülése érdekében a sejtkultúrákat napi vizuális ellenőrzésnek vetik alá.

Fagyasztóközeg
Krioprezerváló táptalajként teljes növekedési táptalajt (beleértve az FBS-t) + 10% DMSO-t használunk a megfelelő kiolvasztás utáni életképesség érdekében, vagy CM-1-et (Cytion katalógusszám: 800100), amely optimalizált ozmoprotektánsokat és metabolikus stabilizátorokat tartalmaz a regenerálódás fokozása és a krio-indukált stressz csökkentése érdekében.
Tárolási feltételek

Hosszú távú tartósítás céljából helyezze az üvegeket gőzfázisú folyékony nitrogénbe, körülbelül -150 és -196 °C közötti hőmérsékleten. A -80 °C-on történő tárolás csak rövid átmeneti lépésként fogadható el a folyékony nitrogénbe való átvitel előtt.

Szállítási feltételek

A kriokonzervált sejtvonalakat szárazjégen, validált, szigetelt csomagolásban szállítják, elegendő hűtőközeggel, hogy a szállítás során a hőmérsékletet körülbelül -78 °C-on tartsák. Átvételkor azonnal vizsgálja meg a tárolóedényt, és haladéktalanul helyezze át az injekciós üvegeket a megfelelő tárolóhelyre.

08Adományozó

Az adományozó életkora
Magzat