Pāriet uz saturu
HEK293-FAP
Audums
Augļa nieres
Slimība
Pārveidots/imortalizēts; neizraisa audzēju veidošanos (HEK293 fons)

Dokumenti

HEK293-FAP

Cell line · Preces numurs 305419

Atbrīvojums no atbildības: Norādītās šūnu līniju cenas attiecas vienīgi uz akadēmiskajiem/bezpeļņas klientiem. Komerciālajām organizācijām cenas...

€1,900.00bez nodokļa un piegādes izmaksām

Pielāgošana / Ieteikumi

Pēc pasūtījuma
1

01Vispārīga informācija

Apraksts

Atbrīvojums no atbildības: Norādītās šūnu līniju cenas attiecas tikai uz akadēmiskajiem/bezpeļņas klientiem. Komerciālām organizācijām cena ir aptuveni 6250 eiro.
Ja pārstāvat komerciālu organizāciju vai neesat pārliecināts, kura kategorija uz jums attiecas, lūdzu, sazinieties ar mums.


HEK293-FAP šūnu līnija ir stabila rekombinanta HEK293 šūnu līnija, kas izstrādāta, lai augstā līmenī ekspresētu fibroblastu aktivācijas proteīnu (FAP) – aptuveni 123 000 molekulu uz šūnu. Šī šūnu līnija tika izstrādāta, izmantojot inscreenex “landing pad” tehnoloģiju, kas nodrošina precīzu un reproducējamu FAP gēna integrāciju specifiskā, iepriekš validētā genomiskā lokusā. FAP, kas pazīstams arī kā Seprase vai DPPIV, ir serīna proteāze, kas piedalās ekstracelulārās matricas pārveidošanā, kas ir īpaši svarīga tādos procesos kā brūču dzīšana, audu atjaunošanās un fibroze. FAP ekspresija ir ievērojami paaugstināta daudzu epitēlija vēža veidu stromā, padarot to par vērtīgu mērķi onkoloģijas pētījumos un potenciālu biomarkeri vēža saistītiem fibroblastiem.

FAP ekspresija šajā šūnu līnijā tika apstiprināta, izmantojot plūsmas citometriju ar mērķa specifisku antivielu, nodrošinot konsekventu un uzticamu receptoru blīvumu visā šūnu populācijā.

Audums
Augļa nieres
Slimība
Pārveidots/imortalizēts; neizraisa audzēju veidošanos (HEK293 fons)
Pieteikumi
FAP-mērķa antivielu un imūnterapijas izstrāde; audzēja stromas bioloģija; ar vēzi saistīto fibroblastu (CAF) pētījumi; ADC un bispecifisko antivielu izstrāde; onkoloģiskā skrīninga

02Klasifikācija

Organisms
Cilvēks
Sekss
Sieviete
Augšanas īpašības
Atbalstītājs
ĢMO statuss
GMO-S1
Sīkāka informācija par ĢMO statusu
GMO-S1: This HEK293 derivative contains a fibroblast activation protein (FAP) expression construct for receptor-function studies. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Bioloģiskās drošības līmenis
1

03Raksturlielumi

Morfoloģija
Epitēlijveidīgs
Šūnu tips
Epitēlija šūnas
Laiks, kas nepieciešams, lai skaits dubultojās
aptuveni 24–36 stundas

04Identifikatori

Atsauce
HEK293-FAP (Cytion kataloga numurs 305419)
NCBI nodokļu identifikācijas numurs
9606
Cellosaurus
CVCL_6G23

05Pazīmes un uzņēmība

Ekspresētie receptori
FAP (Seprase vai DPPIV)

06Apstrāde un audzēšana

Barotne
RPMI 1640, w: 2,0 mM stabils glutamīns, w: 2,0 g/L NaHCO3 (Cytion izstrādājuma numurs 820700a)
Inkubācijas vide

37°C, 5%CO2, mitrināta atmosfēra.

Papildinājumi
Papildiniet barotni ar 10% FBS, 1 mM nātrija piruvātu, 10 mM HEPES, 1% NEAA. Pievienojiet ģenētiķīnu (G418-Sulfat), lai sasniegtu galīgo koncentrāciju 1 mg/ml.
Disociācijas reaģents
Tripsīns-EDTA
Pārstādīšana
Parastai adherentu šūnu kultūrai: Lai noņemtu atlikušo barotni, aspirējiet veco barotni no pielipušajām šūnām un izskalojiet tās ar PBS, lai noņemtu atlikušo barotni. Pēc PBS atsūknēšanas pievienojiet atbilstošu tripsīna/EDTA šķīduma tilpumu atkarībā no kultūras trauka lieluma (piemēram, 1 ml T25 kolbai, 3 ml T75 kolbai) un inkubējiet istabas temperatūrā vai 37 °C, līdz šūnas atdalās (5-10 minūtes). Novērot atdalīšanos ar mikroskopu un, ja nepieciešams, viegli piesitiet trauku, lai atbrīvotu šūnas. Pēc atdalīšanās pievienot pilnu barotni, lai inaktivētu tripsīnu/EDTA, uzmanīgi resuspendēt šūnas un šūnu suspensijas alikvotu pārvietot jaunā barotnē ar svaigu barotni. Ievietot trauku inkubatorā, kas iestatīts 37 °C temperatūrā ar 5 %CO2, un ik pēc 2-3 dienām mainīt barotni.
Sadalījuma attiecība
no 1 līdz 5
Sēšanas blīvums
2 līdz 4 x 104 šūnas/cm2
Šķidruma atjaunošana
2 līdz 3 reizes nedēļā
Atgūšanās pēc atkusņa

Pēc atkausēšanas sadaliet šūnas T25 kolbās proporcijā 1:2 līdz 1:3 un ļaujiet šūnām atgūties no sasaldēšanas procesa un salipt vismaz 24 stundas.

Lai pēc šūnu atkausēšanas nodrošinātu vislabāko piestiprināšanos un dzīvotspēju, iesakām pēc krioatjaunošanas sākotnējai izsēšanai izmantot ar kolagēnu pārklātas kolbas vai plates. Kolagēna pārklājums nav nepieciešams turpmākai ikdienas šūnu kultivēšanai.

Atkausēšana un kultivēšana
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kvalitātes kontrole un kriokonservācija

Sterilitāte

Mikoplazmas piesārņojums tiek izslēgts, izmantojot gan uz PCR balstītus testus, gan uz luminiscenci balstītas mikoplazmas noteikšanas metodes.

Lai pārliecinātos, ka nav baktēriju, sēnīšu vai rauga piesārņojuma, šūnu kultūras katru dienu vizuāli pārbauda.

Saldēšanas barotne
Kā kriokonservēšanas barotni mēs izmantojam pilnvērtīgu augšanas barotni (ieskaitot FBS) + 10 % DMSO, lai nodrošinātu pietiekamu dzīvotspēju pēc atkausēšanas, vai CM-1 (Cytion kataloga numurs 800100), kas ietver optimizētus osmoprotektorus un metaboliskos stabilizatorus, lai uzlabotu atveseļošanos un samazinātu krioinducēto stresu.
Uzglabāšanas nosacījumi

Ilgstošai uzglabāšanai flakonus ievietojiet šķidrā slāpeklī ar tvaika fāzi aptuveni -150 līdz -196 °C temperatūrā. Uzglabāšana -80 °C temperatūrā ir pieļaujama tikai kā īss starpposms pirms pārvietošanas uz šķidro slāpekli.

Piegādes nosacījumi

Kriokonservētas šūnu līnijas tiek sūtītas uz sausā ledus apstiprinātā, izolētā iepakojumā ar pietiekamu dzesēšanas šķidruma daudzumu, lai visā transportēšanas laikā uzturētu aptuveni -78 °C temperatūru. Pēc saņemšanas nekavējoties pārbaudiet iepakojumu un nekavējoties pārvietojiet flakonus uz atbilstošu uzglabāšanas vietu.

08Ziedotājs

Donora vecums
Auglis